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上海慧穎生物科技有限公司

CHL細(xì)胞培養(yǎng)

時(shí)間:2016-5-19閱讀:745

CHL細(xì)胞培養(yǎng)

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幾種乳腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)

我養(yǎng)的細(xì)胞都是乳腺癌細(xì)胞,以下幾種:

1、MCF-7 是一種很好養(yǎng)的人乳腺癌細(xì)胞,培養(yǎng)基用DMEMRPMI1640均可, 1015%的小牛血清就能長(zhǎng)得很好。一般兩到三天傳一代。傳代也很常規(guī)。吸出培養(yǎng)基,加入0.25%的胰酶1ml,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶,使胰酶流遍瓶壁,以去除殘余的培養(yǎng)基。再加入2ml胰酶(25ml培養(yǎng)瓶)靜置消化25min,待細(xì)胞縮起變圓,將胰酶吸出加入培養(yǎng)基3ml吹打成單細(xì)胞懸液分瓶即可。我一般都不用緩沖液沖洗,而直接用胰酶沖洗一下以去除剩余血清的作用,感覺(jué)效果還不錯(cuò)。因?yàn)?/span>MCF-7消化較快,一般不放到培養(yǎng)箱中消化,以免消化太過(guò)。需要注意的是MCF-7生長(zhǎng)較快如不及時(shí)傳代可出現(xiàn)整瓶細(xì)胞浮起,一般都來(lái)不及搶救。

2T47D 也是一種人乳腺癌細(xì)胞,培養(yǎng)基用DMEM1015%的小牛血清,培養(yǎng)方法與MCF-7差不多,但這種細(xì)胞傳代時(shí)間長(zhǎng)了會(huì)極難養(yǎng)。我曾養(yǎng)過(guò)一株新從美國(guó)購(gòu)置的,兩三天傳一代,長(zhǎng)得很旺。后又從國(guó)內(nèi)購(gòu)買(mǎi)一株時(shí)間較長(zhǎng)的,要七天傳一代,而且很嬌氣。

3、MA891 鼠乳腺癌細(xì)胞,這種細(xì)胞比較特殊的是很難消化,容易消化成一團(tuán)一團(tuán)的,如果胰酶的量比常用的多三分之一充分預(yù)熱并放入培養(yǎng)箱中消化就會(huì)好的多。傳到1520代細(xì)胞就易長(zhǎng)成團(tuán),從此生長(zhǎng)緩慢,形態(tài)改變,需要復(fù)蘇重養(yǎng)。

我的骨髓間充質(zhì)細(xì)胞傳代方法

大鼠骨髓經(jīng)ficoll分層后培養(yǎng)。一周換液2次。三周后,可以傳代了。然后大約7天可以傳代一次。跟das1977網(wǎng)友的方法稍微有點(diǎn)不同。

1. 棄去舊培養(yǎng)液。

2.預(yù)熱的PBS液輕緩漂洗細(xì)胞兩遍,盡量洗去殘余血清,棄去PBS

3 0.25%胰酶,0.05%EDTA37度條件下消化,約兩到三分鐘,倒置相差顯微鏡下觀察,細(xì)胞縮成圓形漂浮為準(zhǔn)。我還用手輕輕擊打培養(yǎng)皿的兩側(cè),希望可以加速其消化。實(shí)驗(yàn)室里的人都這么干,我就有樣學(xué)樣了。:)

4.直接加含10%LM-aMEM培養(yǎng)基(或血清)終止消化。

5.我沒(méi)有吹打細(xì)胞這個(gè)過(guò)程哦。下次試試看。但是結(jié)果還是不錯(cuò)的。

6. 離心5分鐘(1200轉(zhuǎn)/分鐘),去上清。

7.加入PBS液吹打混勻,再離心一遍。

8. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,按12傳代。 有一次貪心,按14傳代,結(jié)果細(xì)胞數(shù)太少了,沒(méi)有一瓶長(zhǎng)好的。5555。下次不能貪心了。

9. 補(bǔ)加培養(yǎng)液。75cm2的,加10-15ml

10.送孵箱培養(yǎng)。

 

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H292人肺癌細(xì)胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)

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HNE-2人鼻咽癌細(xì)胞

HO-8910人卵巢癌

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