人類免疫缺陷病毒1型p24抗原

酶聯(lián)免疫試劑盒

【產(chǎn)品名稱】

通用名：人類免疫缺陷病毒1型p24抗原酶聯(lián)免疫試劑盒

英文名：ENZYME IMMUNOASSAY FOR DETECTION OF HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS TYPE I P24 ANTIGEN IN HUMAN SERUM, PLASMA AND CELL CULTURE SUPERNATANT

【包裝規(guī)格】

96人份/盒。

【預(yù)期用途】

本試劑盒用于人類免疫缺陷病毒1型p24抗原（Human Immunodeficiency Virus Type 1 p24 Antigen）的定量檢測，適用于人血清（或血漿）及細(xì)胞培養(yǎng)上清液等標(biāo)本，僅供研究使用。

【檢驗原理】

本產(chǎn)品采用固相酶聯(lián)免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）檢測人血清（或血漿）中的游離HIV-1 p24抗原和細(xì)胞培養(yǎng)上清液等標(biāo)本中的HIV-1 p24抗原。本分析方法是基于雙抗體夾心的非競爭性免疫分析。校準(zhǔn)品和樣品中HIV-1 p24抗原與固相抗- p24單克隆抗體和生物素標(biāo)記的抗-p24多克隆抗體通過免疫反應(yīng)，形成固相抗-p24單克隆抗體—p24抗原—抗-p24多克隆抗體-生物素復(fù)合物；溫育后洗滌，洗去非特異或多余的抗原和多余的生物素標(biāo)記的抗- p24多克隆抗體；然后加入HRP（Horseradish Peroxidase，辣根過氧化物酶）標(biāo)記的鏈親和素，形成固相抗- p24單克隆抗體—p24抗原—抗-p24多克隆抗體-生物素—鏈親和素-HRP復(fù)合物；溫育后洗滌，洗去多余的HRP標(biāo)記的鏈親和素。加入TMB-H₂O₂底物溶液，HRP催化H₂O₂氧化TMB生成藍(lán)色的產(chǎn)物（zui大吸收峰655nm），加入終止液終止酶催化反應(yīng)，生成黃色產(chǎn)物（zui大吸收峰450nm）。其吸光度與校準(zhǔn)品和樣品中的HIV-1 p24抗原濃度成正相關(guān)。通過劑量－反應(yīng)曲線可得出樣品中HIV-1 p24抗原濃度。

【主要組成成份】

【儲存條件及有效期】

試劑盒置2~8℃保存，有效期為12個月。

【適用儀器】

酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱等。

【樣本要求】

1. 樣本：人血清（或血漿）樣本，和細(xì)胞培養(yǎng)上清液等標(biāo)本。
2. 存放：樣本于2~8℃可儲存2天；樣本長期儲存應(yīng)放置于-20℃或-20℃以下環(huán)境中，且不宜反復(fù)凍融5次以上。

【檢驗方法】

1. 試劑配制方法

• HIV-1 p24校準(zhǔn)品系列的配制：

取6支離心管，編號A、B、C、D、E和F。管F中取900µL校準(zhǔn)品稀釋液，加入100µL HIV-1 p24校準(zhǔn)品（200IU/mL，4,000pg/mL），混勻，作1:10稀釋，配制成校準(zhǔn)品F（20IU/mL，400pg/mL）；管E中取500µL校準(zhǔn)品稀釋液，加入500µL校準(zhǔn)品F，混勻，作1:2稀釋，配制成校準(zhǔn)品E（10IU/mL，200pg/mL） ；管D中取500µL校準(zhǔn)品稀釋液，加入500µL校準(zhǔn)品E，混勻，作1:2稀釋，配制成校準(zhǔn)品D（5IU/mL，100pg/mL）；管C中取500µL校準(zhǔn)品稀釋液，加入500µL校準(zhǔn)品D，混勻，作1:2稀釋，配制成校準(zhǔn)品C（2.5IU/mL，50pg/mL）；管B中取500µL校準(zhǔn)品稀釋液，加入500µL校準(zhǔn)品C，混勻，作1:2稀釋，配制成校準(zhǔn)品B（1.25IU/mL，25pg/mL）；以校準(zhǔn)品稀釋液作為校準(zhǔn)品A。共配制成6個濃度的HIV-1 p24校準(zhǔn)品系列（A-F）：A  0、B  1.25IU/mL（25pg/mL）、C  2.5IU/mL（50pg/mL）、D  5IU/mL（100pg/mL）、E  10IU/mL（200pg/mL）和 F  20IU/mL（400pg/mL）。配制好的HIV-1 p24校準(zhǔn)品系列應(yīng)保存在2~8°C，于一月內(nèi)使用。

• 工作濃度洗滌液的配制：

用純水（蒸餾水或去離子水）將濃縮洗滌液稀釋20倍，即為工作濃度洗滌液。工作濃度洗滌液應(yīng)保存在2~8℃，于一月內(nèi)使用。

1. 標(biāo)準(zhǔn)操作方法

• 從鋁箔袋中取出所需數(shù)量的微孔板條，裝至微孔板架上。設(shè)空白對照1孔，HIV-1 p24校準(zhǔn)品A、B、C、D、E和F各2孔，其余各孔為待測樣品，建議每個待測樣品均設(shè)置2孔；編號標(biāo)記。向各孔內(nèi)分別加入25μL的生物素標(biāo)記抗體（空白對照孔不加），然后再向各孔內(nèi)分別加入75μL的HIV-1 p24校準(zhǔn)品或待測樣品，輕輕振蕩微孔板，使內(nèi)容物充分混勻。
• 用封板膜將微孔板密封，置37℃溫育60分鐘。
• 棄去微孔板反應(yīng)孔內(nèi)液體，每孔（含空白對照孔）加入350μL工作濃度洗滌液，然后將洗滌液棄去。重復(fù)洗板共5次，zui后拍干。
• 每孔加 HRP標(biāo)記鏈親和素100μL（空白對照孔不加），用封板膜將微孔板密封，置37℃溫育30分鐘。
• 棄去微孔板反應(yīng)孔內(nèi)液體，每孔（含空白對照孔）加入350μL工作濃度洗滌液，然后將洗滌液棄去。重復(fù)洗板共5次，zui后拍干。
• 每孔加底物緩沖液和顯色劑各50μL（含空白對照孔），用封板膜將微孔板密封，置室溫（18~30℃）避光溫育30分鐘。
• 每孔加終止液50μL（含空白對照孔），輕輕振蕩微孔板，使內(nèi)容物充分混勻。
• 終止反應(yīng)后1小時內(nèi)，用酶標(biāo)儀在450nm波長處，測定各孔吸光度值，參考波長選擇620-700nm。

1. 數(shù)據(jù)處理

• 求出HIV-1 p24抗原校準(zhǔn)品的吸光度平均值。
• 以HIV-1 p24抗原校準(zhǔn)品的吸光度平均值為縱軸，以HIV-1 p24校準(zhǔn)品的濃度為橫軸，在雙對數(shù)坐標(biāo)圖上作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
• 如果待測樣品試驗了2孔，求出待測樣品的吸光度平均值。
• 將測得的樣品的吸光度值（或吸光度平均值）在上述標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出樣品中的HIV-1 p24抗原的濃度。也可以通過軟件用zui小二乘法擬合曲線，求出樣品中的HIV-1 p24抗原的濃度。

【檢驗結(jié)果的解釋】

1. 質(zhì)量控制：空白對照校準(zhǔn)品吸光度值不高于0.050，A點（0pg/mL）吸光度值不高于0.100，F點（400pg/mL）吸光度值不低于1.000。
2. 對于吸光度值超出校準(zhǔn)品F點的樣品，可用校準(zhǔn)品稀釋液稀釋適宜倍數(shù)后再行測定，樣本中HIV-1 p24抗原濃度值為稀釋后測定值×稀釋倍數(shù)。

【檢驗方法的局限性】

1. 本品僅適用于研究用途，不用于臨床診斷。
2. 本品僅適用于游離的HIV-1 p24抗原含量的檢測，不能用于總抗原含量的檢測。
3. 樣本pH應(yīng)保證在5-10之間，過低或過高的pH可能會造成HIV-1 p24抗原的測量值異常。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1. 測定范圍：0~400pg/mL。
2. 分析靈敏度：zui低檢測限不高于5pg/mL。
3. 校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線的線性：線性相關(guān)系數(shù)R>0.9900。典型校準(zhǔn)曲線如下圖
4. 精密性：批內(nèi)變異系數(shù)（Within-Run CV）不高于10%，批間變異系數(shù)（Between-Run CV）不高于15%。
5. 特異性：與HIV-1和HIV-2的env蛋白、pol蛋白和gag蛋白中的p17（1型）等無交叉反應(yīng)。
6. 膽紅素（Bilirubin，20mg/dL）、血紅蛋白（Hemoglobin，500mg/dL）和血脂（Triolein， 3,000mg/dL）對HIV-1 p24抗原的測量值無明顯干擾。
7. 抗凝劑（肝素0.2mg/mL、檸檬酸鈉100mg/mL和EDTA 20mg/mL）對HIV-1 p24抗原的測量值無明顯干擾。

【注意事項】

1. 本品僅適用于研究用途。
2. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，應(yīng)平衡至室溫（18~30℃）后再使用。未用完的微孔條用自封袋密封保存。
3. 儲存和溫育時應(yīng)避光進(jìn)行。
4. 不得直接用手接觸終止液。若不慎接觸則應(yīng)立即用大量自來水沖洗。
5. 操作應(yīng)迅速，加樣品時間過長、洗滌后放置太久均可能影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
6. 每次測定均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
7. 操作應(yīng)按說明書嚴(yán)格進(jìn)行。嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度和時間，并盡量使用移液器加樣，結(jié)果判定以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8. 不同批號試劑請勿混用，不要使用過期試劑。
9. 本品含有部分動物源性物質(zhì)，操作必須符合國家有關(guān)傳染性疾病檢測的實驗室管理及安全的規(guī)定，并按有關(guān)實驗室規(guī)程處理所使用組份及樣品。

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【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱：上海慧穎生物科技有限公司

地    址：上海市嘉定區(qū)鶴旋路

郵政編碼：201800

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