慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)和特性：整合入宿主細(xì)胞基因組，長期表達，可用于轉(zhuǎn)基因動物制備；但也有不同于逆轉(zhuǎn)錄病毒的組份和特性：比逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度，不僅可以感染分裂期細(xì)胞，更重要的，還能感染非分裂期的細(xì)胞。利用慢病毒載體，可以研究啟動子的調(diào)控、過表達特定基因或沉默特定基因。

 慢病毒包裝服務(wù)

 慢病毒簡介

    慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)和特性：整合入宿主細(xì)胞基因組，長期表達，可用于轉(zhuǎn)基因動物制備；但也有不同于逆轉(zhuǎn)錄病毒的組份和特性：比逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度，不僅可以感染分裂期細(xì)胞，更重要的，還能感染非分裂期的細(xì)胞。利用慢病毒載體，可以研究啟動子的調(diào)控、過表達特定基因或沉默特定基因。

慢病毒包裝技術(shù)特點

病毒表達系統(tǒng)	腺病毒表達系統(tǒng)	慢病毒表達系統(tǒng)
病毒基因組	雙鏈DNA病毒	RNA逆轉(zhuǎn)錄病毒
自主復(fù)制	不能	不能
是否整合	病毒基因組游離于宿主基因組外，瞬時表達外源基因	病毒基因組整合于宿主基因組，長時間、穩(wěn)定表達外源基因
感染細(xì)胞類型	感染絕大多數(shù)細(xì)胞，包括分裂期、非分裂期細(xì)胞。	感染絕大多數(shù)細(xì)胞，包括分裂期、非分裂期細(xì)胞。
表達豐度	高水平表達	中水平表達
表達時間	快（1-2 天）	慢（2-4 天）
滴度	滴度可達10E12pfu/mL	滴度可達10E9－10E10TU/mL
克隆容量	可插入高達8kb的外源片段，滴度隨插入片段長度增加而降低	可插入不超過8kb的外源片段，滴度隨插入片段長度增加而降低
免疫原性	高免疫原性	低免疫原性
RNAi	病毒進入細(xì)胞往往引起細(xì)胞內(nèi)干擾素反應(yīng)，一般情況下不適合做RNAi實驗	適合，是RNAi實驗的優(yōu)選工具
基因過表達	包裝容量較大，可以滿足較大基因的包裝，是過表達基因的優(yōu)選工具	包裝容量有限，過表達的基因過大時，病毒滴度受到影響
過表達microRNA	適合	適合，是過表達microRNA實驗的優(yōu)選工具
下調(diào)microRNA	有報道但不成熟	有報道但不成熟
是否可以自行擴增	可以	需要特殊包裝系統(tǒng)和包裝環(huán)境

 

慢病毒包裝服務(wù)流程

A. 慢病毒載體的構(gòu)建：

根據(jù)不同的研究需求構(gòu)建慢病毒載體，如用于RNAi的慢病毒載體、用于基因過表達的慢病毒載體、用于啟動子活性研究的慢病毒載體等；

B. 慢病毒包裝過程：

    將重組病毒質(zhì)粒及其輔助包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至包裝細(xì)胞中，收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液，對其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，在293T細(xì)胞中測定并標(biāo)定病毒滴度。

C. 慢病毒包裝結(jié)果：

滴定濃度：1×107～1×108TU/ml

zui終體積：1 ml純化后的病毒液（儲存于PBS）

儲存：批量儲存的*條件為-80°C。

慢病毒包裝用途：

慢病毒載體包裝之后成為假病毒顆粒后，可用于:

• 感染原代細(xì)胞；
• 制備穩(wěn)定表達/沉默特定基因的單克隆細(xì)胞株；
• in vivo的基因操作；
• 轉(zhuǎn)基因動物，特別是轉(zhuǎn)基因大鼠的制備。