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原位雜交/地高辛原位雜交/CISH/組織原位雜交/細胞原位雜交

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更新時間:2017-08-02 12:23:23瀏覽次數:2930次

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原位雜交/地高辛原位雜交/CISH/組織原位雜交/細胞原位雜交
原位雜交組織(或細胞)化學 (In situ Hybridization Histochemistry, ISHH) 簡稱原位雜交(In Situ Hybridization),屬于固相分子雜交的范疇,它是用標記的DNA或RNA為探針,在原位檢測組織細胞內特定核酸序列的方法。根據所用探針和靶核酸的不同,原位雜交可分為DNA-DNA雜交

 

原位雜交

服務簡介:

    原位雜交組織(或細胞)化學 (In situ Hybridization Histochemistry, ISHH) 簡稱原位雜交(In Situ Hybridization),屬于固相分子雜交的范疇,它是用標記的DNA或RNA為探針,在原位檢測組織細胞內特定核酸序列的方法。根據所用探針和靶核酸的不同,原位雜交可分為DNA-DNA雜交,DNA-RNA雜交和RNA-RNA雜交三類。根據探針的標記物是否直接被檢測,原位雜交又可分為直接法和間接法兩類。直接法主要用放射性同位素、熒光及某些酶標記的探針與靶核酸進行雜交,雜交后分別通過放射自顯影、熒光顯微鏡術或成色酶促反應直接顯示。間接法一般用半抗原標記探針,zui后通過免疫組織化學法對半抗原定位,間接地顯示探針與靶核酸形成的雜交體。

服務流程:

1. 根據客戶送的樣本(固定好或者包埋好),以及樣本類型,安排實驗

2.包埋或者切片后,根據客戶所測指標,設計特異性探針,標記示蹤物。然后進行一系列反應。

3.(可選)根據上述所做好的切片進行拍片,分為熒光顯微鏡(激光共聚焦顯微鏡)或普通光學顯微鏡

4.(可選)針對做好的玻片進行分析,分析時選取較好的區域,分析三個視野

5.提供實驗報告:包括詳細的實驗方法及原位雜交實驗結果的相關圖表 

操作步驟:

   取材:
    ● 0.1M PBS (pH 7.2) 浸 5-10min。
    ● 0.1M甘氨酸/0.1M PBS 浸5min。
    ● 0.3%TritonX-100/0.1M PBS 浸10-15min。
    ● 0.1M PBS 洗 5min×3次,加蛋白酶K(1μg/ml),37℃孵育30 min。
    ● 4%多聚甲醛浸5min。
    ● 0.1M PBS 洗 5min×2次,浸入新鮮配制的含0.25%乙酸酐/0.1M三乙醇胺中10min。
    預雜交:滴加適量預雜交液,42℃ 30 min。
    雜交:傾去預雜交液,在每張切片上滴加10-20μl雜交液(將探針變性后稀釋在預雜交液中,0.5 ng/μl ),覆以蓋玻片或蠟膜,42℃ 過夜。(陰性對照)
    洗片:(1) 4×SSC、2×SSC、1×SSC、0.5×SSC 37℃各洗20min;0.2×SSC 37℃洗10min;0.2×SSC與0.1M PBS各半洗10min;0.05M PBS 洗 5min×2次。
    ● 3% BSA/0.05M PBS 包被,37℃ 30min.
    ● 滴加抗地高辛-抗血清堿性磷酸酶復合物(以抗體稀釋液1:5000稀釋)4℃孵育過夜。
    ● 0.05M PBS洗15min×4次; TSM1 10min×2次; 新鮮配制TSM2 10min×2次。
    顯色:在玻片上滴加適量顯色液,4℃避光過夜。
    ● 將玻片置于TE中10-30min以終止反應。
    ● 酒精梯度脫水、二甲苯脫脂。
    ● 中性樹膠封片,顯微鏡下觀察結果

交貨內容:

完整的實驗報告,包括實驗過程、所用儀器試劑、蠟塊玻片和相關分析數據

 

收費標準/服務周期/提供結果:
詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。

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