細胞侵襲

服務目的：

研究趨化因子或其他營養(yǎng)物質對細胞侵襲的影響
服務原理：

將細胞種于上室，趨化因子等種于下室，細胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑。與遷移實驗不同是侵襲實驗需要在小室聚碳酸酯膜上鋪設一層基質膠。用以模仿體內細胞外基質，細胞欲進入下室，先要分泌基質金屬蛋白酶（MMPs）將基質膠降解，方可通過聚碳酸酯膜。計數進入下室的細胞量可反映腫瘤細胞的侵襲能力。

客戶提供：

1.提供檢測樣本的樣本信息、檢測應用及檢測時間點等；

2.若客戶提供細胞：25T細胞培養(yǎng)瓶，灌滿培養(yǎng)基新鮮運輸或提供細胞凍存管，干冰運輸

服務流程：

1. matrigel在4℃過夜融化
   2. 稀釋matrigel至終濃度1mg/ml
   3. 在chamber上室底部中央垂直加入稀釋后的matrigel。37℃溫育4-5 h
   4. 所有細胞培養(yǎng)試劑和Transwell chamber放在37℃恒溫水浴箱溫育
   5. 消化培養(yǎng)至對數期的細胞，用無血清培養(yǎng)基懸浮細胞，計數，調整濃度為5*10⁵/ml
   6. 在下室加入含20%血清的培養(yǎng)基。上室加入細胞懸液，37 ℃、5％CO²、飽和濕度條件下繼續(xù)培養(yǎng)24 h
   7. 取出chamber，吸干上室液體，移到預先加入甲醇的孔中，室溫固定30min
   8. 取出chamber，吸干上室固定液，移到預先加入結晶紫染液的孔中，室溫染色            15-30min；用PBS沖洗浸泡數次，取chamber，先用干棉簽將上室內液體吸去，再用棉簽輕輕擦Matrigel凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞
   9. 揭下膜表面上的細胞，晾干，封片
   10. 顯微鏡下計數，統(tǒng)計結果；（若不用保存底膜，可省去步驟9）

收費標準/服務周期/提供結果：
詳談，我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。

【本公司合作項目】
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