克隆形成實驗
實驗介紹 :
當單個細胞在體外增殖6代以上,其后代所組成的細胞群體,成為集落或克隆。每個克隆含有50以上的細胞,大小在0.3-1.0mm之間。集落形成率表示細胞的獨立生存能力。各種理化因素可能導致細胞的克隆形成能力發生改變。通過一定的實驗方法可以對細胞的克隆形成能力進行檢測。
實驗方法:
平板集落形成實驗、軟瓊脂集落形成實驗
(a) 平板集落形成實驗:本法適用于貼壁生長的細胞和正常培養的細胞
(b) 軟瓊脂集落形成實驗:本法適用于非錨著依賴性生長的細胞,如骨髓造血干細胞、腫瘤細胞株、轉化細胞系。
注意事項:
(a) 瓊脂對熱和酸不穩定,若反復加熱,容易降解而產生毒性,且硬度下降。因此高壓滅菌后應進行分裝;
(b) 細胞在進行克隆形成實驗時要求有95%以上的分散度,否則結果的準確度會受到很大影響;
(c) 軟瓊脂與細胞混合時溫度不能超過40℃,否則將會燙傷/死細胞;
(d) 接種時細胞密度適度,不可過高。
細胞在低密度、非貼壁狀態條件下培養,生存率明顯下降,永生細胞系/株克隆形成率可達到10%以上,但初代培養細胞和有限傳代細胞系克隆形成率僅為0.5%-5%,甚至無法形成單個克隆。因此,為了提高克隆形成率,有時需要在培養基中添加胰島素、地塞米松等促克隆形成物質。
細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數,但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞??寺⌒纬陕史从臣毎后w依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細胞生物學性狀不同,細胞克隆形成率差別也很大,一般初代培養細胞克隆形成率弱,傳代細胞系強;二倍體細胞克隆形成率弱,轉化細胞系強;正常細胞克隆形成率弱,腫瘤細胞強。并且克隆形成率與接種密度有一定關系,做克隆形成率測定時,接種細胞一定要分散成單細胞懸液,直接接種在碟皿中,持續一周,隨時檢查,到細胞形成克隆時終止培養。
服務流程:
1、 討論分析實驗方案
2、 確定服務內容
3、 簽訂服務合同
4、 進行實驗,定期向客戶反饋
5、 整理實驗報告
6、 完成合同內容
7、 后續實驗服務,進一步合作
收費標準/服務周期/提供結果:
詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。
【本公司合作項目】
慢病毒,腺病毒,RNAi類,分子生物實驗,病理實驗,免疫學實驗,細胞實驗,動物實驗,蛋白組學實驗等,能夠進行藥效學評價、毒理學評價、細胞藥篩、動物建模、病理檢測、蛋白組學、代謝組學、高通量測序、ChIP、CO-IP、生物信息學分析服務!
詳情請咨詢:
【公司】www.mxbio.cn
【】021-54581185
【技術咨詢】
【公司】shmxbio
【公司地址】上海市閔行區滄源路1200號2218室