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高通量蛋白質組學/ iTRAQ

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更新時間:2017-08-03 09:26:09瀏覽次數:2398次

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高通量蛋白質組學/ iTRAQ
iTRAQ試劑為可與氨基酸N端及賴氨酸側鏈連接的胺標記同重元素(isobaric)。在質譜圖中,任何一種iTRAQ試劑標記的不同樣本中的同一蛋白質表現為相同的質荷比。
在串聯質譜中,信號離子表現為不同質荷比(114~117)的峰,因此,根據波峰的高度及面積,可以得到蛋白質的定量信息。

 

iTRAQ

iTRAQ技術原理: 
        iTRAQ試劑為可與氨基酸N端及賴氨酸側鏈連接的胺標記同重元素(isobaric)。在質譜圖中,任何一種iTRAQ試劑標記的不同樣本中的同一蛋白質表現為相同的質荷比。
        在串聯質譜中,信號離子表現為不同質荷比(114~117)的峰,因此,根據波峰的高度及面積,可以得到蛋白質的定量信息。
技術特點:
1.可同時標記2~8 個樣本。
2. iTRAQ技術不僅可發現胞漿蛋白,還有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。iTRAQ技術可檢測出低豐度蛋白、強堿性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
3.可標記修飾后的氨基酸,因此對磷酸化蛋白等翻譯后修飾蛋白進行定性定量研究。
4.報告離子的相對分子質量較低(113~121),低分子量區是質譜定性(質量確定)和定量(豐度比較)較為準確的區域,因此質譜檢測更為靈敏可靠。

iTRAQ試劑包括三部分:

1. 報告基團(reporter group):相對分子量為113-121Da(無120),因此iTRAQ試劑可同時標記8組樣品。

2. 平衡基團(balance group):相對分子量為192-184Da (無185),使得八種iTRAQ試劑分子量均為305 Da,保證標記的同一肽段m/z相同。

3. 肽反應基團:能與肽段N端及賴氨酸側鏈氨基發生共價連接,從而標記上肽段 拿到蛋白樣品之后,不同組的樣品首先分別進行等量酶切,每一個酶切得到的肽段樣品選擇一種標記試劑進行標記反應(每一個肽段至少含有一個游離的氨基進行反應);然后將經過不同標記的肽段樣品混合后進行后續的質譜分析。

 

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