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HY STEMCELL 人間充質干細胞培養基（無血清，臨床級）
閱讀：3582發布時間：2017-12-22
人間充質干細胞培養基已經發展到了第三代：
*代 培養基+牛血清
第二代 培養基+牛血清替代品：人血清、血小板裂解液和臍帶血清
第三代 無血清、無動物源、成分確定的培養基
第三代人間充質干細胞培養基不含牛血清或人血清之類的血清替代品，無動物源而且成分確定，免除了異種血清帶來的病原體污染風險，而且批次穩定，適合干細胞治療的臨床研究。
HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質干細胞無血清培養基
中文名：HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質干細胞無血清培養基
英文名：HY STEMCELL CCGmHuMTM Human MSCs Growth Medium
HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質干細胞無血清培養基是成分確定、無血清、無異源物，無需鋪板膠的*培養基。適用臍帶或脂肪來源的人間充質干細胞的原代培養擴增。培養的hMSC可傳多代。
特點
Serum-free 無血清成分
Xeno-free 無動物源
Chemically-defined 化學成分明確
NO plate coating necessary 無須昂貴的鋪板蛋白
Perform better than FBS medium 生長分化優于血清培養基
組份
HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質干細胞無血清培養基包括【Basal Medium 基礎培養基】 和 【Supplement Medium 細胞因子添加物】兩部分。基礎培養基中添加HEPES和L-谷氨酰胺。細胞因子添加物中含有多種細胞生長因子、粘附蛋白、轉鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。
產品 | 貨號 | 規格 | 儲存 |
CCGmHuM Human MSCs Medium | HX0201M | 套裝 |
|
CCGmHuM Human MSCs Basal Medium | HX0202M | 450mL | 2～8℃ |
CCGmHuM Human MSCs Supplement Medium 10X | HX0203M | 50mL | –20°C |
培養表現
使用HY StemCell CCGmHuMTM 人間充質干細胞無血清培養基培養人臍帶間充質干細胞，傳到第7代，MSC形態功能維持良好。
應用
適用于原代培養臍帶或脂肪組織來源的人間充質干細胞。
培養條件
培養基：*培養基
細胞系：臍帶或脂肪組織來源的人間充質干細胞
細胞類型：貼壁
儲存
基礎培養基保存在2～8℃。細胞因子添加物保存在–20°C。
使用注意
為保障活性，建議把【Supplement Medium 細胞因子添加物】一次解凍后分裝再凍存，不宜反復凍融。
訂購信息
品牌 | 貨號 | 產品描述 | 包裝 | 目錄價 |
HY StemCell | HX0201M | CCGmHuMTM Human MSCs Medium 人間充質干細胞無血清培養基 | 1 Kit | 3000元 |
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背景知識
2015年國家重新開放干細胞行業政策以來，衛計委等已經發布了多個文件：
《國家重點研發計劃干細胞與轉化醫學重點專項實施方案（征求意見稿）》
目標：凝聚優勢力量，重點針對干細胞發生，發育和形成功能細胞過程中的重要科學問題，深入開展干細胞、生物材料、組織工程、生物人工器官，以及干細胞與疾病發生等方面的基礎研究、應用基礎研究和轉化開發。整體提升我國干細胞及其轉化醫學領域的實力，加快科研成果的應用。
任務：1. 多能干細胞干性維持機制。2. 組織干細胞的獲得及功能。3. 干細胞定向分化及細胞轉分化機制。4. 干細胞的體內功能與作用機制。5. 基于干細胞的器官再造。6. 干細胞資源庫。7. 干細胞臨床前評估。8. 干細胞轉化與應用。
《干細胞制劑質量控制及臨床前研究指導原則》（試行）（征求意見稿）
提出了適用于各類可能應用到臨床的干細胞（除已有規定的造血干細胞移植外）在制備和臨床前研究階段的基本原則。每個具體干細胞制劑的制備和使用過程，必須有嚴格的標準操作程序并按其執行，以確保干細胞制劑的質量可控性以及治療的安全性和有效性。
培養基部分摘錄：
培養基 干細胞制劑制備所用的培養基成分應有足夠的純度并符合無菌、無致病微生物及內毒素的質量標準,殘留的培養基對受者應無不良影響；在滿足干細胞正常生長的情況下，不影響干細胞的生物學活性，即干細胞的“干性”及分化能力。在干細胞制劑制備過程中，應盡量避免使用抗生素。
若使用商業來源培養基，應選擇有資質的生產商并由其提供培養基的組成成分資料及相關質量合格證明。必要時，應由專業檢定機構對每批培養基進行質量檢驗，并出具檢驗報告。
除特殊情況外，應盡可能避免在干細胞培養過程中使用人源或動物源性血清，不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動物血清，應確保其無特定動物源性病毒污染。嚴禁使用海綿體狀腦病流行區來源的牛血清。
若培養基中含有人的血液成份，如白蛋白、轉鐵蛋白和各種細胞因子等，應明確其來源、批號、質量檢定合格報告，并盡量采用國家已批準的可臨床應用的產品。
《干細胞臨床研究管理辦法（試行）》
關于干細胞臨床研究的醫療機構的條件與責任、干細胞臨床研究的立項與備案、臨床研究流程及要求、臨床研究報告制度、專家委員會責任和監督管理。
《*干細胞臨床研究機構名單》*30家單位
《第二批干細胞臨床研究備案機構》次批72家單位 2017年11月
《干細胞通用要求》
該要求圍繞干細胞制劑的安全性、有效性及穩定性等關鍵問題，建立了干細胞的供者篩查、組織采集、細胞分離、培養、凍存、復蘇、運輸及檢測等的通用要求
可見，干細胞治療的臨床研究正在標準規范化。使用無血清培養基更加安全，監管要求更少。
一 人間充質干細胞培養基的發展
人間充質干細胞的來源
從1970年發現以來，脂肪組織、胎盤、牙髓、滑膜、外周血、牙周韌帶、子宮內膜、臍帶和臍帶血中都有研究發現間充質干細胞[1]，不過應用比較多的來源還是骨髓、脂肪和臍帶組織中的間充質干細胞[2]。目前，異體間充質干細胞密度zui高來源是臍帶，每毫升zui高能獲得470萬個MSC，而自體間充質干細胞密度zui高來源是脂肪組織，每毫升zui高能獲得155萬個MSC[3]。HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質干細胞無血清培養基就是適用臍帶和脂肪組織來源的hMSC培養。
圖源網絡：臍帶和華通氏膠
人間充質干細胞的培養發展[4]
人間充質干細胞的下游應用是組織修復等疾病治療，因此它的培養要滿足醫用的高標準。隨著臨床應用的成熟，間充質干細胞培養基也經歷了從有血清到無血清培養基的轉變。
有血清培養基一開始使用的是胎牛血清，胎牛血清是天然產品，批次間差異大，影響實驗穩定性，尤其還是異源物，會有病原體污染風險和免疫影響，不利治療安全，需要額外監管。于是越來越多的血清培養基選擇了自體或同源異體的人源血清作為培養基添加物，包括人血清、血小板裂解液和臍帶血清。
低血清或人源血清仍然不夠穩定，也不能*免除病原體的污染風險，隨之興起的是成分確定的無血清培養基。無血清培養基用重組人蛋白代替血清中的天然蛋白，以此來消滅異種蛋白輸入人體可能會引起的免疫抗體反應。比如血清中zui基礎的白蛋白、轉鐵蛋白和胰島素，無血清培養基都改用重組人轉鐵蛋白和重組人胰島素代替，而不是提取天然產物。無血清培養基發展中，確定了多種生長因子是人間充質干細胞擴增必須添加的。HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質干細胞無血清培養基細胞因子添加物中含有多種細胞生長因子、粘附蛋白、轉鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。
二 人類間充質干細胞的分離與原代培養方法[5]
新生兒臍帶間充質干細胞分離與原代培養
新生兒臍帶組織剝取華通氏膠，以組織塊培養法或酶消化法分離新生兒間充質干細胞，
貼壁法做原代培養。
新生兒臍帶血來源間充質干細胞分離與原代培養
新生兒臍帶血樣本，與磷酸緩沖液 1:1 稀釋后，以密度梯度離心法分離單個核細胞，貼壁法培養。定期更換培養基直到貼壁生長的成纖維細胞樣的細胞達到匯合。
新生兒胎盤間充質干細胞分離與原代培養
剝取胎盤羊膜、絨毛膜或絨毛組織，以酶消化法分離胎盤間充質干細胞，貼壁法做原代培養。
人類脂肪間充質干細胞分離與原代培養
成人脂肪組織，以酶消化法分離脂肪間充質干細胞，貼壁法做原代培養。
人類牙髓間充質干細胞分離與原代培養
牙齒樣本，完整剝離牙髓，以酶消化法分離牙髓間充質干細胞，貼壁法做原代培養。
人類骨髓間充質干細胞分離與原代培養
人骨髓液樣本，以密度梯度離心法分離骨髓間充質干細胞，貼壁法作原代培養。
人類宮內膜間充質干細胞分離與原代培養
宮內膜組織樣本以酶消化法分離子宮內膜干細胞，并做原代培養。或
人羊水來源間充質干細胞分離與原代培養
人羊水樣本，100 目濾器過濾后離心，棄上清。以培養液重懸細胞沉淀，貼壁法培養。
定期更換培養基直到貼壁生長的成纖維細胞樣的細胞達到匯合。
人類母乳來源間充質干細胞分離與原代培養
人類母乳樣本，100 目濾器過濾后離心，棄上清。以培養液重懸細胞沉淀，貼壁法培養。定期更換培養基直到貼壁生長的成纖維細胞樣的細胞達到匯合。
人類滑膜來源間充質干細胞分離與原代培養
人類滑膜組織樣本，以酶消化法分離滑膜間充質干細胞。離心洗滌后，貼壁法培養。定期更換培養基直到貼壁生長的成纖維細胞樣的細胞達到匯合。
參考文獻
1 FENG-JUAN LV et al.Concise Review: The Surface Markers and Identity of Human Mesenchymal Stem Cells.2014.
2 Marcin Majka et al.Concise Review: Mesenchymal Stem Cells in Cardiovascular Regeneration: Emerging Research Directions and Clinical Applications.2017.
3 C. ThomasVangsness Jr. et al.Umbilical Cord Tissue Offers the Greatest Number of Harvestable Mesenchymal Stem Cells for Research and Clinical Application: A Literature Review of Different Harvest Sites.2015.
4 Dolly Mushahary et al.Isolation, C*tion, and Characterization of Human Mesenchymal Stem Cells.2017.
5 SZDB/Z 126 2015《人類間充質干細胞庫建設與管理規范》
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