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彌散性血管內(nèi)凝血?jiǎng)游锬P?/h3>

2018-9-13  閱讀(2444)

彌散性血管內(nèi)凝血?jiǎng)游锬P?/h2>

彌散性血管內(nèi)凝血(disseminated intravascular coagulation, DIC)是臨床上一種獲得性綜合征,它可由各種不同的原因引發(fā)。臨床上DIC主要表現(xiàn)為由微血管血栓形成和栓塞引起的多臟器功能障礙、出血、休克和微血管病性溶血性貧血。 DIC代表了臨床病理的一系列連續(xù)的嚴(yán)重表現(xiàn),其主要特征是血管內(nèi)凝血機(jī)制激活后,其局限性或代償性控制進(jìn)行性喪失。DIC的發(fā)生及發(fā)展機(jī)制十分復(fù)雜,許多影響因素至今仍未闡明。無論在何種原發(fā)病或何種因素誘導(dǎo)下發(fā)生 DIC,機(jī)體凝血系統(tǒng)活化均既存在順序性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的特征,也存在正、負(fù)反饋使凝血反應(yīng)放大或受到限制的特征。 DIC時(shí)通常顯示纖維蛋白分布在多種器官中,是導(dǎo)致器官功能衰竭的原因。抗凝治療是阻斷DIC病理過程的重要措施之一,其目的在于抑制廣泛性微血栓形成的病理過程,防止血小板及各種凝血因子進(jìn)一步消耗。為恢復(fù)其正常含量、重建正常的凝血與抗凝血平衡創(chuàng)造條件。因此,建立理想的 DIC動(dòng)物模型,用于實(shí)驗(yàn)研究非常重要。

1 高分子右旋糖酐誘導(dǎo)大鼠彌散性血管內(nèi)凝血模型

(1)復(fù)制方法  體重為250~400g、10月齡雄性Wistar大鼠。按30mg/kg體重的劑量經(jīng)腹腔注射戊丨巴丨比丨妥丨鈉麻醉,大鼠仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上,頸部皮膚常規(guī)消毒與去毛。無菌手術(shù)暴露頸動(dòng)脈、靜脈,分別插管。用130g/L高分子右旋糖酐(分子量為480000)按15ml/kg體重的劑量經(jīng)頸靜脈注射,1min或3min注完。于給藥*min及給藥后10、20、30min進(jìn)行微循環(huán)觀察,經(jīng)顯微電視錄像觀察回腸下段腸系膜血管(包括一二級(jí)微動(dòng)脈和一二級(jí)微靜脈)流態(tài)以及微血流流態(tài)、血細(xì)胞聚集情況;給藥后30min時(shí),經(jīng)模型大鼠頸動(dòng)脈取血作相關(guān)凝血功能指標(biāo)的檢測,并進(jìn)行血漿魚精蛋白副凝試驗(yàn)(3R試驗(yàn));主要觀察指標(biāo):模型大鼠微循環(huán)積分值、全血黏度、血漿黏度、相對(duì)黏度、血小板黏附率和聚集率、血小板計(jì)數(shù)、血漿凝血酶原時(shí)間、纖維蛋白原水平、裂體細(xì)胞檢查。注射后30min麻醉處死大鼠,分別取其肺、腎、心等組織經(jīng)10%甲醛溶液固定后,作常規(guī)組織切片,HE染色,光鏡下形態(tài)學(xué)觀察。

(2)模型特點(diǎn)  模型動(dòng)物微血管流態(tài)變化突出,注射高分子右旋糖酐后流速變慢、血細(xì)胞淤滯、聚集、微血流呈粒緩流,出現(xiàn)嚴(yán)重的微循環(huán)障礙。用田牛氏微循環(huán)加權(quán)積分標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算流態(tài)積分值,發(fā)現(xiàn)模型大鼠流態(tài)積分值明顯高于實(shí)驗(yàn)前和正常對(duì)照動(dòng)物,這些變化細(xì)動(dòng)脈比細(xì)靜脈更明顯。造模后,模型動(dòng)物血小板黏附率、聚集率明顯增強(qiáng),血小板計(jì)數(shù)顯著減少,凝血酶原時(shí)間延長,纖維蛋白原降低,與正常動(dòng)物相比有顯著性差異;模型動(dòng)物3R試驗(yàn)均為陽性。鏡下病理組織學(xué)觀察顯示:模型大鼠可見纖維索性血栓和混合血栓,尤以肺內(nèi)多見,其血涂片可見大量裂體細(xì)胞。本方法復(fù)制的大鼠DIC模型屬于急性型,其特點(diǎn)為凝血因子的消耗性減少、繼發(fā)纖溶系統(tǒng)的亢進(jìn)、血液流變學(xué)和微循環(huán)的明顯障礙。本模型制作方法簡便,應(yīng)用范圍廣,效果穩(wěn)定。

(3)比較醫(yī)學(xué)  本模型的致病機(jī)制是當(dāng)靜脈注射高分子右旋糖酐后,模型大鼠微血流積分值升高,血流變慢;血液流動(dòng)性的異常,導(dǎo)致了機(jī)體血管舒縮功能的紊亂,為DIC的發(fā)生創(chuàng)造了條件,此時(shí)無論血管收縮、血流減少,還是血管舒張、血流淤滯,都不利于促凝物質(zhì)和活化凝血因子從局部清除,而有利于纖黏蛋白(FN)在局部沉降。此外注射高分子右旋糖酐后模型動(dòng)物的血黏度、血漿黏度、血小板黏附和聚集性均明顯增強(qiáng),導(dǎo)致機(jī)體血液動(dòng)力學(xué)出現(xiàn)異常。由于血液動(dòng)力學(xué)異常和血流阻力的變化密切相關(guān),當(dāng)血黏度增高時(shí),血流阻力明顯加大,其直接的結(jié)果就是造成微循環(huán)的明顯障礙,導(dǎo)致組織細(xì)胞包括內(nèi)皮細(xì)胞的損害,進(jìn)而加重微循環(huán)障礙,如此惡性循環(huán)推動(dòng)模型動(dòng)物DIC的進(jìn)展。本模型的疾病特征與臨床患者的DIC類似,適用于DIC藥物治療和藥物篩選方面的實(shí)驗(yàn)研究。

2 脂多糖誘導(dǎo)兔彌散性血管內(nèi)凝血模型

(1)復(fù)制方法  體重2kg左右雄性新西蘭兔,按30mg/kg體重的劑量經(jīng)耳緣靜脈注射戊丨巴丨比丨妥丨鈉麻醉,麻醉后將兔仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上,頸部皮膚常規(guī)消毒與去毛。頸部正中無菌手術(shù)作一切口,鈍性分離左側(cè)頸總動(dòng)脈,結(jié)扎動(dòng)脈遠(yuǎn)心端,用18G靜脈插管針穿刺并固定,以備留取標(biāo)本用。按2.5mg/kg體重的劑量經(jīng)兔耳緣靜脈緩慢注入脂多糖(lipopolysaccharide),分2次注射給藥,間隔1h,每次脂多糖注射時(shí)間約為10min。注射脂多糖前及注射后2、4、6h分別采取兔血作活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、纖維蛋白原、血小板計(jì)數(shù)、抗凝血酶Ⅲ、血清纖維蛋白降解產(chǎn)物(FDP)檢測。并于造模結(jié)束時(shí)麻醉處死動(dòng)物,取心、肺、腎、脾與肝組織,用10%甲醛溶液固定,作常規(guī)組織切片,HE染色,光鏡下觀察。

(2)模型特點(diǎn)  注射脂多糖后,模型兔活化部分凝血活酶時(shí)間明顯延長,血小板計(jì)數(shù)和纖維蛋白原顯著降低,抗凝血酶Ⅲ活性明顯下降,血清FDP無明顯變化。鏡下病理組織學(xué)觀察顯示,模型兔的心、肝、肺、腎、脾臟均可見微血栓形成,肺組織中尚有大量炎癥細(xì)胞浸潤。

(3)比較醫(yī)學(xué)  DIC是一種彌散而隱匿的血管內(nèi)血液凝固現(xiàn)象,它可導(dǎo)致機(jī)體凝血因子不斷消耗,臨床上可造成患者廣泛出血。本模型制作過程中,當(dāng)注射脂多糖后兔的靜脈穿刺部位有滲血,30min時(shí)動(dòng)物出現(xiàn)呼吸頻率明顯增快、紫紺,血小板數(shù)量呈進(jìn)行性降低,APTT明顯延長;鏡下病理組織學(xué)觀察心、肺、肝、腎、脾組織內(nèi)均有纖維蛋白血栓形成,證實(shí)靜脈注射脂多糖可成功復(fù)制兔DIC模型。但模型動(dòng)物血FDP無明顯改變,表明脂多糖引起的DIC以消耗性凝血為主,纖溶活性改變不大;同時(shí)模型動(dòng)物注射脂多糖后2、4、6h后APTT均顯著延長,提示脂多糖誘發(fā)DIC過程中機(jī)體內(nèi)源性凝血途徑被啟動(dòng),此時(shí)體內(nèi)可通過外源性和內(nèi)源性途徑生成凝血酶,后者有廣泛的促凝血和促血栓形成作用。本方法復(fù)制的DIC模型顯示纖維蛋白分布在多種器官中,可導(dǎo)致模型動(dòng)物發(fā)生多器官功能衰竭,模型DIC表現(xiàn)與臨床上人類發(fā)生的DIC相似,可用于DIC發(fā)病機(jī)制及藥物篩選方面的實(shí)驗(yàn)研究。



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