怎么挑選到適合自己試驗的抗體

一、關于特異性的選擇：特異性的選擇首要需求考慮四個方面：蛋白特異性、種屬特異性、實驗方法特異性、符號物的特異性。
1、ELISA試劑盒蛋白特異性：針對需求檢測的蛋白查找抗體，幾個細節要差異，重組表達的蛋白和內源性蛋白的檢測，對抗體的要求是不一樣的，留心查看抗體說明書的檢測說明。如果重組蛋白不是全長表達，則需求留心抗體的免疫原區域是否在重組蛋白區域內。內源性蛋白能清楚其剪切與修飾的方法，特別表型的蛋白需求進行序列比對，并結合抗體免疫原序列，查看交叉反應的情況。磷酸化蛋白檢測需求判定具體位點，不同位點的磷酸化意味著可能有不同的機制存在，不宜相提并論。
2、種屬特異性：同種蛋白不同物種，有著或大或小的差異。現在大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或規劃多肽抗原的，根據蛋白的同源性的情況與其他種屬發作交叉反應。需求參照說明書注明的可反應種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體，可以通過蛋白的序列比對，選擇同源序列免疫的抗體，不過一般這種情況生產商不會受理其關于質量的申訴，如果可以申請到免費的抗體樣品，則利于抗體選擇。
3、實驗方法特異性：現在運用抗體的實驗方法有許多，不同的運用方法過程中，因為對蛋白樣品的處理方法不一樣，蛋白的含量有差異，對抗體的辨認表位和效價要求都是不一樣的。具體的根據說明書注明的產品應用方法進行選擇。但是生產商一般不會將每個抗體都進行各種實驗的檢測，現在檢測比較多的只是WB、IHC、IF等，如果針對具體的實驗方法沒有找到適宜的抗體的，可以結合蛋白序列分析和抗體的抗原信息，選擇盡可能有效果的抗體。相同，申請到免費的抗體樣品是個很好的途徑。
4、符號物的特異性一般根據實驗操作的實驗方法不會運用帶有符號的一抗，比如WB、IHC等，都是通過二抗類的試劑符號抵達效果呈現的目的。但是根據儀器分析的一些實驗，可能就會運用到直接符號的一抗，比如流式實驗。那么需求了解到自己行將運用的儀器能檢測到的熒光規劃，不通的參數要求選擇對應的符號物。在免疫熒光雙標實驗中，需求選配不同的熒光物。
二、抗體種屬來歷的選擇：有人認為單抗比多抗好，其實這并不是一個謹慎的觀念，只能說在可能性上單抗的特異性更好一些，而多抗的親和力會優于單抗，而且特異性并不必定就遜于單抗，首要看抗原的規劃水平。現在商品化抗體里單抗首要是鼠單抗、兔單抗，多抗首要是兔多抗、山羊多抗等，其他種屬來歷抗體較少。不建議糾結于單抗好仍是多抗好，能做出實驗的抗體就是好抗體。在選擇上一般建議實驗種屬和抗體種屬親緣性越遠越好，不宜同源。抗體不同種屬會要影響接下來二抗的選配。特別是在免疫熒光雙標實驗中，需求在差異于實驗種屬的基礎上，差異開兩個方針的抗體種屬來歷，以便于二抗差異辨認。
三、關于性價比的選擇：抗體的質量凹凸畢竟仍是需求通過實驗效果來呈現的，但是在選擇抗體之前我們并無法判別抗體的效果怎么。不管什么品牌的，不管進口仍是國產的，都會有用得不錯的產品，也都會有做不出來的產品。抗體歸于異質化產品，不同品牌之間，甚至同一品牌的不同產品之間，抗體質量差異都較為顯著，而且沒有共同的衡量規范。這是抗體選擇中zui難的一個問題。許多人習慣于根據實驗室傳統認識或參考文獻上運用的產品進行選擇，但是因為不同批次間的抗體效果也是有差異的，所以并不能*確保正確選擇。在這種情況下，抗體的售后就尤為重要，遇到抗體質量阻礙時，可以確保有效地解決問題，不至于影響實驗的開展。現在有部分品牌可以供應免費的抗體小樣的，無疑對這個問題是一個很好的解決方案。先判定抗體是否適宜自己的實驗，可以避免因為抗體質量投訴耽誤實驗安排。在價格方面，需求謹記，zui貴的不必定就是的，zui適宜你的實驗的才是的。花許多錢買到很貴的抗體，再花上很長的時刻去投訴的情況并不稀有。只買對的，不買貴的。在選擇價格的時分還要留心規范巨細、抗體濃度、效價規劃等，要歸納考慮。在規范方面，根據畢竟可以稀釋成的作業液的量的來衡量更為。許多老品牌供應的抗體產品根本都是以大包裝為主，就單個課題的實驗而言，過大的包裝有時會形成很大的。現在Proteintech、Bioworld、CellSignal等品牌都相繼推出小包裝的抗體，這在必定程度上給選擇者更大的選擇自由度，可以根據運用產品的效價，計算出自己實踐需求的抗體量，做到精判定量采購。
四、關于品牌的選擇：因為抗體質量的異質化，關于抗體的品牌選擇就被我們所重視，但是不管是什么品牌都難免會遇到不適宜自己實驗的抗體。所以一般建議考慮那些業界廣泛認可、購買便當、專業、售后處理方便的品牌。一些甚至都沒有正式署理的，只能備選。一同購買時必定要找可以供應產品教導、實驗分析、售后處理的正規署理商購買，避免因為買到假貨水貨影響實驗。
五、ELISA試劑盒關于其他一些小細節：抗體選擇與運用過程中，多少還會遇到一些意想不到的作業。有些細節，仍是需求多留心一些。如在選擇做阻斷或中和實驗時，有時需求將抗體加到細胞培養液中，這是需求留心抗體是否含有疊氮鈉。如果是大包裝的抗體，進行分裝是比較節省的方法，如果是價的，可以配成母液再分裝。抗體的短時刻運送，用一般冰塊堅持溫度是可以滿足要求的。其他不要糾結于WB過程中分子量的問題。許多時分，我們看到相同的抗體，不同的品牌，甚至同一品牌不同的貨號，標示的分子量都不一樣。其實可能只是生產商只檢測時運用了不同的種屬不同的樣品類型，或是參照了不同的文獻，對運用者來說，相同的樣品，不管運用哪個品牌的，只需抗體是對的，目的條帶只會呈現在相同的方位。關于分子量的問題，一般不建議看產品說明，WB中條帶的方位由樣品決議，并不會因為抗體不同而不同。所以在檢測蛋白之前，我們可以通過數據庫或參考文獻，對行將檢測的蛋白做個比較全面的了解，包括其可能剪切與修飾的情況、表型的情況等。在*次運用一個新的抗體時，不要根據分子量橫向剪膜，可以保存幾個全泳道，看看條帶方位或分布的情況。