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大鼠堿性鞘磷脂磷酸二酯酶(Alk-SmaHZ)檢測試劑盒的對照說明
1.封閉時間改用37度2h,是4度24h
2.洗板改成5次以上
以上為了保證減少非特異性吸附造成的顯色,影響對結果的判斷和分析。
結果顯示:1:10、1:100、1:200、1:400的陰、陽血清均隨抗原呈現剃度變化。
陽性血清呈梯度變化是可以理解的,但陰性血清不該這么明顯,原因有二:a.包被抗原量不足,大鼠堿性鞘磷脂磷酸二酯酶(Alk-SmaHZ)檢測試劑盒封閉不夠充分,導致板條仍有未封閉的位點,可以和酶標抗體結合,自然包被抗原量越多,位點越少,則顯色越弱。b.陰性血清稀釋度過低,導致仍存在非特異的結合,在封閉*的情況下,要保證陰性血清OD值低,根據具體情況可以稀釋到1000倍或以上都可以。
抗原空白對照背景低,但一抗空白對照背景高,甚至比陰性血清OD值高。
這點用封閉不*比較好解釋,陰性血清在這里相當于起了一個封閉作用,酶標抗體結合少了,顯色自然低了。
大鼠堿性鞘磷脂磷酸二酯酶(Alk-SmaHZ)檢測試劑盒另外1:10稀釋的陰性血清和陽性血清OD值相差較大,這與報道較多的1:100稀釋效果好有些出入,不知是否可以用于以后檢測時的稀釋倍數??以上原因是否與包被抗原未進行較高提純以及封閉有關?
OD值相差較大,但首先要看陰性對照的本底如何(較空白空如何)?如果本底高,是會對結果造成影響的。這里需要找出稀釋度。
大鼠堿性鞘磷脂磷酸二酯酶(Alk-SmaHZ)檢測試劑盒抗原的提純是取決于抗體特異性的,如果所使用的為單抗,對抗原純度要求可以不高,但是如果是多抗,那么抗原不純將容易引起非特異性的顯色。
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