一站式動(dòng)物mRNAOUT產(chǎn)品及特點(diǎn)
構(gòu)建cDNA文庫(kù)、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR方法檢測(cè)稀有的mRNA等研究常常需要從總RNA中分離mRNA，mRNA只占總RNA的1%左右，但由于帶poly(A)尾巴，所以可以通過(guò)與Oligo(dT)纖維素的親和結(jié)合而與其他RNA（如rRNA、tRNA等）分離開(kāi)。本產(chǎn)品專(zhuān)門(mén)用于從動(dòng)物組織中提取mRNA，其操作步驟如下：
具有下列特點(diǎn)：
1. 一站式，由柱式動(dòng)物RNA提取試劑和mRNA提取試劑兩個(gè)產(chǎn)品整合而成，即開(kāi)即用，非常方便。
2. 一次可以處理50-100 mg的動(dòng)物組織，能得到約10-15 μ g總RNA，從中可得0.1-0.5 μ g左右mRNA。
3. Oligo(dT)纖維素吸附能力強(qiáng)，每克可以吸附50-80 OD的mRNA，相當(dāng)于2000-3000 μ g mRNA。
4. mRNA提取過(guò)程操作簡(jiǎn)單，只需要離心就可以完成，免去了常規(guī)的灌柱、洗柱等繁瑣操作。
5. 得到的mRNA可以直接用于構(gòu)建cDNA文庫(kù)、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR。
使用及效果
1. 用柱式動(dòng)物RNAOUT的方法提取動(dòng)物總RNA，zui后用50μL洗脫，將兩管收集在一起，共得到100μL總RNA（詳見(jiàn)柱式動(dòng)物RNAOUT的使用手冊(cè)）。
2. 從總RNA中純化mRNA：將0.5 mL 溶液A（結(jié)合液）加入到一管裝有Oligo(dT)纖維素的離心管中，放置5分鐘后離心吸棄上清后待用。將制備的總RNA100μL加熱到65℃ 5分鐘后加入等體積的溶液A，轉(zhuǎn)移到裝有Oligo(dT)纖維素的離心管中，顛倒混勻數(shù)次，離心后將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)離心管中。用0.5 mL溶液A混
勻后4℃ 200 g 離心5分鐘，小心棄上清。重復(fù)上步洗3-5次。用DEPC水洗脫并收集mRNA。
3. 用微量核酸沉淀劑沉淀mRNA（詳見(jiàn)微量核酸沉淀劑使用手冊(cè)）。
注：所得mRNA只占總RNA的5%左右，很微量很珍貴，一般不宜電泳檢測(cè)。