目錄:和元李記（上海）生物技術(shù)有限公司>>蛋白與免疫>>蛋白定量>> AP12L034/AP12L036PikoOrange蛋白定量試劑盒
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100 assays |
|---|---|---|---|
| 貨號 | AP12L034/AP12L036 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | PikoOrange Protein Quantitation Kit是一個高度 |
產(chǎn)品描述
PikoOrange Protein Quantitation Kit是一個高度敏感的基于熒光技術(shù)定量純化蛋白質(zhì)的試劑盒，其檢測蛋白濃度范圍為0.1~10 μg/ml。比起傳統(tǒng)定量方法如BCA、Bradford或Lowry蛋白定量分析，PikoOrange蛋白定量試劑盒敏感性更佳，此外，與NanoOrange蛋白質(zhì)定量測定技術(shù)相比具有更好的的線性和重現(xiàn)性。PikoOrange蛋白定量試劑盒可顯示不同蛋白質(zhì)之間的小變異性，且熒光信號穩(wěn)定長達(dá)16 h；其受測樣本不論為純化蛋白或抗體皆適用。需特別注意的是，PikoOrange對鹽類、緩沖液、去垢劑或是其他化學(xué)物質(zhì)都有不同程度的耐受性（表1）。
產(chǎn)品信息
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
| PikoOrange 蛋白定量試劑盒 | AP12L034 | 100 assays | 180 |
| PikoOrange 蛋白定量試劑盒 | AP12L036 | 1000 assays | 1500 |
產(chǎn)品組分
| 組分 | AP12L034 | AP12L036 |
| A: PikoOrange buffer, 10X (contains 2mM sodium azide) | 2.5 mL | 25mL |
| B: PikoOrange dye, 500X in DMSO | 125 μL | 1.25 mL |
| C: Bovine serum albumin (BSA) standard, 2mg/mL (contains 2 mM sodium azide) | 40 μL | 0.4 mL |
運輸與保存
常溫運輸。組分A常溫保存；組分B常溫避光保存；組分C 4℃ 保存。有效期36個月。
【注】：如果緩沖液出現(xiàn)沉淀，可加熱到37℃并漩渦溶解。
使用方法
制備1x PikoOrange緩沖液: 1:10 稀釋10x緩沖液在dH2O。例如，添加1 mL10x 緩沖液至9 mL dH2O。 PikoOrange緩沖液可以儲存在室溫下。
使用前準(zhǔn)備PikoOrange工作液：將200xPikoOrange染料按1:200用1x PikoOrange緩沖液稀釋。例如，添加25 μL 500x PikoOrange染料至5 mL 1x PikoOrange緩沖液。
注意：您將需要大約3 mL工作液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（見表2)以及每孔檢測樣品250 μL工作液。
準(zhǔn)備未知樣本：10 μL 樣本添加 250 μL PikoOrange工作液。
注意：您可能需要稀釋未知樣本以得到不同濃度的樣本。樣品稀釋可能會減少干擾物質(zhì)的影響。
準(zhǔn)備一個蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線所需的BSA濃度，如表2所示。
樣本和標(biāo)準(zhǔn)蛋白加熱至90~ 95℃ 10分鐘，此過程需避光操作。
取出樣本室溫避光放置20 min冷卻。短時間離心收集全部樣本。
每個標(biāo)準(zhǔn)樣品或未知樣品取200 μL轉(zhuǎn)移到96孔酶標(biāo)板，熒光酶標(biāo)儀讀數(shù)。激發(fā)/發(fā)射波長為480/598 nm。
【注】：樣品可以被轉(zhuǎn)移到熒光試管使用熒光儀測量。如果需要超過200 μL體積測量，等比例放大配置方案。
表1：PikoOrange對不同化學(xué)物質(zhì)的耐受性
| 化合物 | 承受濃度峰值 |
| SDS | 0.01% |
| Triton X-100 | Below 0.001% |
| Tween 20 | Below 0.001% |
| CHAPS | Below 0.001% |
| Sodium deoxycholate (DOC) | Below 0.001% |
| Urea | 10 mM |
| DTT | 100 mM |
| beta-ME | 0.1% |
| Ammonium sulfate | 1 mM |
| Sodium azide | 2 mM |
| Imidazole | 50 mM |
| DNA | 10ug/mL |
| EDTA | 1mM |
| Sucrose | 10 mM (0.34%) |
| Glycerol | 1% |
| PBS | 0.02X |
| NaCl | 1 mM |
| CaCl2 | 0.01 mM |
| MgCl2 | 0.2 mM |
表2：準(zhǔn)備BSA樣品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
| BSA體積 | 工作液體積 | BSA 終濃度（μg/mL） | ||
| A | 5 μL BSA std (2 mg/mL) | 995 μL | 10 | |
| B | 250 μL solution A | 250 μL | 5 | |
| C | 250 μL solution B | 250 μL | 2.5 | |
| D | 200 μL solution C | 300 μL | 1 | |
| E | 250 μL solution D | 250 μL | 0.5 | |
| F | 250 μL solution E | 250 μL | 0.25 | |
| G | 100 μL solution F | 150 μL | 0.1 | |
| H | 0 μL solution G | 250 μL | 0 | |
 圖1：PikoOrange比NanoOrange有更好的線性和重現(xiàn)性 | ||||
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