發根農桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌，它能夠感染大多數雙子葉植物和少數單子葉植物以及個別裸子植物。
操作說明：
一：0.1cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發，待乙醇揮發干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。
二：取-80℃保存的農桿菌感受態插入冰中5分鐘，待其融化，加入0.01-1 μg質粒DNA（體積不大于6ul，最好用試劑盒抽提，雙蒸水溶解；轉化效率較高，第一次使用前最好做預實驗確定所加質粒的量），用手bo打管底混勻，立即插入冰中，用200μl槍頭將感受態-質粒混合物快速移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用。
三：啟動電轉儀，設置參數：C=25μF，PC=200ohm，V=2400V（此參數為Biorad推薦，使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作），將電擊杯從冰中拿出，吸水紙吸干外表面水份，快速放入電轉槽中，啟動電擊，電擊完成快速插入冰中，加入1ml無抗生素的TY，并轉移到感受態空管中，28℃振蕩培養2~3小時。
四：6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的TY平板上，倒置放于28℃培養箱培養2-3天。
3
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務