目錄:合肥恩派爾貿(mào)易有限公司>>Abnbio感受態(tài)細(xì)胞>>克隆感受態(tài)細(xì)胞 非電擊>> MC1061F-Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞
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更新時(shí)間：2024-03-21 15:26:50瀏覽次數(shù)：285評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50支100ul |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | ABG027-50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
| 主要用途 | 細(xì)胞培養(yǎng) |
MC1061F- Chemically Competent Cell
基因型：
araD139 Δ (araA-leu)7697 Δ(lac)X74 galK16 galE15(GalS)lambda- e14- mcrA0 relA1 rpsL150(StrR) spoT1 mcrB1 hsdR2
簡(jiǎn)要說(shuō)明：
MC1061F-菌株來(lái)源于E.coli B/r型SB3118菌株，同時(shí)也是DH10b及TOP-10的母本菌株。MC1061F-化轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率ji高，可用作實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)質(zhì)粒構(gòu)建及噬菌體展示實(shí)驗(yàn)，但缺乏F`因子，不能用于絲狀噬菌體（比如M13）的感染。不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶對(duì)質(zhì)粒的污染。此菌株具有l(wèi)ian霉素抗性。 MC1061F-感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>2×109 cfu/μg DNA。
操作說(shuō)明：
1. MC1061F-感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌2YT或LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15 h。
注意事項(xiàng)：
1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
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