原代細胞傳代技術
一、貼壁細胞的消化法傳代
1、吸除或倒掉瓶內舊培養液。
2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或與EDTA混合液)輕輕搖動培養瓶,使瓶底細胞都浸入溶液中。
3、消化2-5分鐘后把培養瓶放置在顯微鏡下進行觀察,發現原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時,棄去消化液,加入培養液終止消化。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液,分別接種到另外兩到三個培養瓶中,置37℃培養箱中繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。
二、懸浮細胞的傳代
1、直接傳代
① 讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3。
② 用吸管吹打形成細胞懸液后,分別接種到另外兩到三個培養瓶中,置37℃培養箱中培養。
2、離心法傳代
① 將細胞連同培養液一并轉移到離心管內,離心800-1000rpm,5分鐘。
② 去除上清,加新的培養液到離心管內,用吸管吹打使之形成細胞懸液。
③ 將細胞懸液分別接種到另外兩到三個培養瓶中,置37℃培養箱中培養。