細胞培養過程中常見問題及其解答
1.如何選用培養基?
培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長??傊?,MEM做粘附細胞培養 、RPMI-1640做懸浮細胞培養,各種目的無血清培養的是AIM V培養基(SFM)。
2.為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學 研究、培養ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
3.L-谷氨酰胺在細胞培養 中重要嗎?它在溶液中不穩定嗎?
L-谷氨酰胺在細胞培養 時是重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間后會降解,但是確切的降解率一直沒有終確定。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。
4.GlutaMAX-I是什么?培養細胞如何利用GlutaMAX-I?這個二肽有多穩定 ?
GlutaMAX-I二肽是L-谷氨酰胺的衍生物,將其不穩定的α-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩定,即使在121磅滅菌20分鐘,GlutaMAX-I二肽溶液有小的降解,如果在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎*降解。