血清知識大盤點
01、血清的顏色如何?
為何有的胎牛血清顏色偏紅,而有的偏黃?是因為胎牛血清顏色是由血紅蛋白(鮮紅)和膽紅素(黃)決定的,主要是受血紅蛋白影響。血紅蛋白含量很低時,含少量膽紅素,呈淡黃或金黃。血紅蛋白含量高時,會呈現(xiàn)淡紅色。
需要長期保存的血清必須儲存于-20℃冰箱(未開封血清有效期為5年)。若存放于4℃,請勿超過1個月,若一次無法用完一瓶,建議將血清無菌分裝并冷凍。
02、血清如何解凍,使用前是否需要過濾?
血清解凍需采用逐步解凍法:將血清從-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解一天,然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),減少沉淀生成。切勿直接將血清從-20℃轉(zhuǎn)入37℃解凍,這樣因溫差較大易造成蛋白質(zhì)凝結并出現(xiàn)沉淀。
經(jīng)過3次0.1μm過濾,出廠經(jīng)過檢測并且會使用三種以上的細胞株進行培養(yǎng)測試及無菌檢測,污染幾率非常非常非常(重要的事情說三遍)低。通常細胞污染有非常多的可能性,根據(jù)協(xié)助使用者進行分析檢測,結果表明絕大部分都是因人為操作失誤導致污染。因此買來的血清不需要再次進行過濾。
肉眼和光學顯微鏡所能觀察到的微粒大小。由于我們的血清是經(jīng)過3次0.1μm過濾,因此若肉眼可以觀察到異物時,可以考慮:
是否血清溶解后蛋白質(zhì)凝集
是否操作時導入污染物
03、為什么血清中會有沉淀生成,主要成分是什么,會對實驗有什么影響?
血清中沉淀主要有:纖維蛋白(絮狀沉淀),胎球蛋白[1],脂蛋白,冷凝集素,玻連蛋白,磷酸鈣(顯微鏡下小黑點沉淀),膽固醇等。
原因:造成沉淀的主要原因是溫度的改變。熱滅活,反復凍融,長期儲存于2-8℃或者室溫。
預防:非必要,不用熱滅活;避免反復凍融;-20℃保存;4℃全融(期間間斷搖晃均勻);2000rpm離心5分鐘(不建議用0.2um濾膜過濾) ,取上清使用。
04、黑膠蟲是來源于血清嗎?
目前科學界對黑膠蟲的身份并無定論, 通常是顯微鏡下觀察到密密麻麻的小黑點在培養(yǎng)基中自主游動,就稱為黑膠蟲污染。本公司技術服務部”Dr.Cell” 目前檢測的數(shù)十個所謂”黑膠蟲”樣本,其中62%為細菌(如Sphingomonas paucimobilis,Blastomonas natatoria strain),38%為支原體(如:Mycoplasma hyorhinis,Mycoplasma pulmonis strain)。黑膠蟲在鏡下的典型特征呈卵圓狀、球狀、桿狀等,可引起細胞生長遲緩或裂解凋亡。目前沒有充分的數(shù)據(jù)表明黑膠蟲來源于血清,因為其尺寸遠大于血清過濾時所用的0.1微米(μm)濾膜。建議各位老師通過使用三抗(Cat#: 03-032-1B)外加支原體處理試劑(Cat#: 03-038-1B)嘗試殺滅黑膠蟲。
05、血清存在批間差嗎?
因為血清來源于動物,其組成成分有1000種左右,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。每個批號的組分和百分比含量都是不固定的,所以批間差異是存在的。
建議先進行批號測試,篩選出合適批號,購買半年甚至一年以上的用量,避免批間差造成實驗波動(胎牛血清在-20℃保存可達5年)。