GIBCO胰酶是一種自豬胰中提取的多種酶的混合物,主要為胰蛋白酶、胰淀粉酶與胰脂肪酶。其通過在特定位置上降解蛋白,使細(xì)胞間結(jié)合處蛋白降解,這時(shí)細(xì)胞由于自身部細(xì)胞骨架的力作用下成為球形,從而使細(xì)胞分開。作用時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類、作用溫度、作用ph等因素而變化很大,從幾分鐘到幾十分鐘不等。配制時(shí)不能用含鈣、鎂離子的平衡液,否則影響活性。那么我們來看看GIBCO胰酶的具體配置方法:
1、培養(yǎng)液配制,方便好用,對細(xì)胞影響小,并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解
2、生理鹽水配制,要先調(diào)ph值7.2到7.4(①胰酶(1:250)2.5克②EDTA-Na0.3克③NaCl8.0克④KCl0.4克⑤Glucose1.0克⑥PhenolRed0.005克⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時(shí),調(diào)pH7.8-8.0,過濾除菌。)
3、pbs(0.1%胰酶溶液的配制:稱取胰酶粉末0.1g,先用少許滅菌過的PBS調(diào)成糊狀,然后補(bǔ)足到100ml。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過夜,過濾滅菌,分裝,4℃保存?zhèn)溆谩#?或是hanks或是D-hanks液配制(1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,先用少許D-Hanks平衡鹽溶液(pH7.2左右)調(diào)成糊狀,然后再補(bǔ)足D-Hanks平衡鹽溶液,攪拌混勻,置室溫4小時(shí)或冰箱過夜,并不斷攪拌振蕩;2.次日,先用濾紙粗濾,再進(jìn)行過濾除菌,分裝入瓶中,低溫冰箱保存?zhèn)溆茫S脻舛葹?.25%或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至7.2左右。)
一般0.45微米的一次性濾器過濾除菌,至于作用效果,需要消化一次細(xì)胞感覺一下,因?yàn)椴煌瑥S家的酶不一樣,有的作用溫和,有的作用劇烈。
4、是否需要四度放置過夜,取決于你的胰酶的純度。過去的胰酶純度不高,所以難以溶解,需要四度過夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高,就沒有必要四度過夜。從理論上來說,四度放置過夜,給細(xì)菌生長的機(jī)會(huì),盡管過濾可以出去細(xì)菌,可是出不掉其代謝產(chǎn)物。