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經(jīng)典培養(yǎng)基中不同成分的作用及選擇原則

閱讀:3005        發(fā)布時間:2022/11/18
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一般實驗室在確定培養(yǎng)基種類后,還會遇到培養(yǎng)基有不同分型的情況。那么對于經(jīng)典培養(yǎng)基中不同成分的作用及選擇原則又是什么呢?請往下看 ~


1.葡萄糖(Glucose):


作用:細胞生長所需的主要能量來源。


? 如何選擇不同葡萄糖含量的培養(yǎng)基?


最初的 DMEM 中,葡萄糖濃度為 1 g/L,現(xiàn)在稱其為低糖型 DMEM,適合培養(yǎng)多數(shù)哺乳動物細胞;

高糖型 DMEM 中的葡萄糖濃度為 4.5 g/L,適合生長速度快,附著性較差的腫瘤細胞;

使用無糖培養(yǎng)基的主要目的是,通過控制細胞的能量來源,研究細胞的代謝過程或葡萄糖利用效率


2.HEPES:


作用:pH 緩沖劑。


是一種氫離子緩沖劑,其作用不依賴于 CO2;

在一定范圍內(nèi)對細胞無毒性作用,能較長時間控制恒定的 pH 范圍,保證細胞良好生長;

部分細胞對酸堿度的變化非常敏感,建議使用 HEPES;

根據(jù)需要,非必需。


3.L-谷氨酰胺(L-glutamine):


作用:L-谷氨酰胺是一種氨基酸,細胞的重要能量來源,參與蛋白質(zhì)的合成,也為合成核酸提供碳源。


? 存在的不足:


L-谷氨酰胺不穩(wěn)定,在中性的水溶液中會自發(fā)降解;

降解產(chǎn)物氨對細胞有毒性;

對氨敏感的細胞(如干細胞和原代細胞等)或培養(yǎng)環(huán)境(高密度反應(yīng)器,無補料的長期培養(yǎng))不推薦含 L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基。


? 解決方案:


選擇不含谷氨酰胺的培養(yǎng)基,在使用前再添加 L-谷氨酰胺,并盡快用完;

選擇穩(wěn)定的谷氨酰胺替代物,如 glutaGRO。


4.酚紅(Phenol red):


作用:pH 值的指示劑(中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色)。


? 何時選擇不含酚紅的培養(yǎng)基?


培養(yǎng)干細胞或細胞克隆時傾向于不加酚紅;

酚紅可以模擬固醇類激素的作用(特別是雌激素);

酚紅的顏色會干擾流式檢測,不建議使用含酚紅的培養(yǎng)基制備細胞樣品(通常用 PBS)。


5.碳酸氫鈉(Sodium bicarbonate):


作用:pH 緩沖劑。


pH 6.8~7.8 為細胞生長的最佳 pH 條件;

多數(shù)培養(yǎng)基利用碳酸氫鈉進行緩沖;

碳酸氫鈉的緩沖需要 CO2;

1.高碳酸氫鈉(1.5~3.7 g/L)需要 5~10% CO2 培養(yǎng);


2.低碳酸氫鈉(0.35 g/L)不需要 CO2 培養(yǎng)。


干粉培養(yǎng)基在配制時需要單獨添加。



6.丙酮酸鈉(Sodium pyruvate):


作用:能量來源。


丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源;

葡萄糖不足的時候,細胞可以代謝丙酮酸鈉;

保證細胞更好地生長;

根據(jù)需要,非必需組分。


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