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賽默飛熱循環儀特點
Thermo Fisher Scientific(賽默飛)的熱循環儀是一種用于進行聚合酶鏈式反應(PCR)的實驗室設備。以下是使用Thermo Fisher熱循環儀的具體方法和注意事項。
主要步驟
1. 準備PCR反應混合物
在無菌環境中將以下試劑按照PCR反應體系的要求混合在PCR管中：
模板DNA
正向引物和反向引物
dNTPs(脫氧核苷三磷酸)
PCR緩沖液
MgCl2(如果緩沖液中不包含)
Taq DNA聚合酶或其他熱穩定DNA聚合酶
無菌水
2. 設置PCR儀參數
根據實驗要求設置PCR儀的參數，包括：
初始變性：95℃，2-5分鐘
循環參數(通常30-40個循環)：
變性：95℃，30秒
退火：50-65℃，30秒(根據引物的Tm值調整)
延伸：72℃，30秒-1分鐘(根據擴增片段的長度調整，每1000 bp需1分鐘)
最終延伸：72℃，5-10分鐘
保溫：4℃
3. 加載PCR反應管
將準備好的PCR反應管放入熱循環儀的模塊中，確保每個反應管都放置牢固，避免接觸不良。
4. 啟動熱循環儀
選擇預設的程序或手動輸入上述設置，啟動PCR反應。
5. 監控和完成反應
在PCR反應進行過程中，監控儀器運行情況。反應完成后，熱循環儀會自動降溫到保溫溫度(通常為4℃)。
6. 分析PCR產物
反應完成后，通過瓊脂糖凝膠電泳等方法進行PCR產物分析。
熱循環儀的型號
Thermo Fisher提供多種型號的熱循環儀，常見的有：
Applied Biosystems™ SimpliAmp™ Thermal Cycler
Applied Biosystems™ Veriti™ Thermal Cycler
Applied Biosystems™ ProFlex™ PCR System
使用注意事項
無菌操作：確保無菌環境，避免污染。
合理設置參數：根據實驗需求優化退火溫度和循環次數。
試劑質量：使用高質量試劑，確保實驗結果的可靠性。
設備維護：定期校準和維護熱循環儀，確保其正常運行。
通過以上步驟，你可以有效地使用Thermo Fisher熱循環儀進行PCR實驗。每個型號的具體操作界面和功能可能略有不同，建議參閱設備的操作手冊以獲取詳細信息和指導。
