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杭州仟諾生物科技有限公司>>細胞株>>人源細胞系>> D2F2小鼠乳腺癌細胞系

D2F2小鼠乳腺癌細胞系

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產品簡介

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D2F2小鼠乳腺癌細胞系
該細胞公司*,培養狀態下的,現貨一周供應,我公司可100%保障該細胞的質量,代數年輕活性好,不含有細菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體 。

詳細介紹

D2F2小鼠乳腺癌細胞系

保存:4℃保存一年,-20℃長期保存
用途:可用于科研實驗培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。

培養操作

1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。

 2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
     1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。  

     3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。

     4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

 3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;

    1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

D2F2小鼠乳腺癌細胞系

細胞接收后的操作流程與注意事項:
1、如果細胞為貼壁細胞,而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態,請將懸浮的細胞即時離心,加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶繼續培養3天;同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基培養3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現增值而是繼續脫落死亡,請及時聯系實驗室技術人員會跟進解決
2、貼壁細胞生長緩慢;適當提高血清濃度(最高不能超過20%),或可根據該細胞生長密度,考慮胰酶消化后,轉移到新的培養瓶繼續培養
3、生長不均:貼壁細胞若出現分布不均,成島狀生長,可將細胞進行消化,重懸打散細胞,加入新鮮培養基進行培養
 細胞常規培養傳代流程(請嚴格遵照無菌操作)
1、吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2-3ml 0.25%胰酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在1-2min)
2、鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰酶,加6-8ml*培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散
3、細胞取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的*培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養
4、注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存
特別注意:(如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養,建議添加雙抗培養)
1、收到細胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養基,如因特殊情況需要繼續使用原瓶,請在原瓶培養基中額外添加10%的血清,(原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時)
2、貼壁細胞收到當天切忌立刻消化,請將細胞換液后放置培養箱孵育到第二天再做消化傳代,請優先選擇直徑6cm的培養皿進行傳代培養
3、如簽收時出現培養瓶壁破裂,漏液等情況請及時做好照片記錄并聯系實驗室CRL-5870    NCI-H1435 Cells    ,公司專業提供美國ATCC細胞庫來源正常細胞系、腫瘤細胞系、癌細胞系(三千多種),提供細胞株生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、系、疾病、組織、凍存條件等復蘇及凍存說明書信息,我們擁有豐富的細胞系培養經驗,能提供細胞培養*的技術支持,讓您實驗再無煩擾!

 

CRL-5872    NCI-H1437 Cells    ,公司專業提供美國ATCC細胞庫來源正常細胞系、腫瘤細胞系、癌細胞系(三千多種),提供細胞株生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、系、疾病、組織、凍存條件等復蘇及凍存說明書信息,我們擁有豐富的細胞系培養經驗,能提供細胞培養*的技術支持,讓您實驗再無煩擾!
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CRL-5881    NCI-H1623 Cells    ,公司專業提供美國ATCC細胞庫來源正常細胞系、腫瘤細胞系、癌細胞系(三千多種),提供細胞株生物體、生長特性、細胞來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、系、疾病、組織、凍存條件等復蘇及凍存說明書信息,我們擁有豐富的細胞系培養經驗,能提供細胞培養*的技術支持,讓您實驗再無煩擾!
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