PC-12大鼠腎上腺髓質嗜鉻瘤高分化細胞株

英文名稱:PC-12 (differentiated), PC12, rat adrenal chromaffin cell tumor differentiation (differentiated)

規格:5×151cells/瓶

產品貨號:EY-X0109

細胞數量:1×1000000個細胞數

細胞純度:93%

傳代方法: 1:2傳代;3-4天一次

運輸保存:

采用干冰保存運輸收到細胞時，若干冰已經*融化，請立即將細胞復蘇培養;若尚留有干冰，請立即將細胞放入液氮中保存待用，請按條件貯存細胞，切不可將細胞置于高溫環境。

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

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冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。

冷凍保存方法二:冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。

操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養，隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養。

PC-12大鼠腎上腺髓質嗜鉻瘤高分化細胞株

貼壁細胞接收后的操作流程與注意事項
1.收到細胞當天盡快更換新鮮*培養基，第二天再進行消化處理
2.如果細胞收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶繼續培養觀察。同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基，培養觀察
3.若出現生長不均：貼壁細胞若出現分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養基進行培養

貼壁細胞常規培養傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）
1.吸出原培養瓶中的培養基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加適量0.25%胰酶進行消化細胞（注意把握消化時間）
2.鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml *培養基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散
3.取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中，添加適當的*培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養
4.注意培養基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項作或者凍存