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細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理與技術(shù) 現(xiàn)代生物技術(shù)一般認(rèn)為包括基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù),而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細(xì)胞培養(yǎng)有密切關(guān)系,特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展,細(xì)胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價值。
杭州仟諾生物科技有限公司 |
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參考價 | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn) |
更新時間:2024/07/30 15:35:38瀏覽次數(shù):498
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形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法
傳代情況
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:11,12;D13S317:8,12;D16S539:12;D18S51:18;D19S433:14;D21S11:29,32.2;D2S1338:18,19,27;D3S1358:14,17;D5S818:12;D7S820:8,12;D8S1179:12;FGA:24,25;TH01:9,9.3;TPOX:8,11;vWA:15,16;
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
CL-0056CCD-1095Sk(人浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
β-半乳糖苷酶比色檢測試劑盒GalC
Cates-1B細(xì)胞,人淋巴胚胎性癌細(xì)胞 SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞(亞系),293T/17細(xì)胞 食管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 ×105次方(1ml)
大耳山羊肺細(xì)胞;LDG-1
SFRP1 Others Mouse 小鼠 sFRP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
PC-12(低分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化)
CL-0195RH-35(大鼠肝癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
人腎皮質(zhì)上皮細(xì)胞(HRCEpiC)( 5×105 )
人食管癌細(xì)胞;EC109 大鼠腦成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S3
SERPINA10 Others Mouse 小鼠 SERPINA10 / SerpinA10 / ZPI 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤細(xì)胞;DCS
人胚胎絨毛細(xì)胞(HAF)(1×106 )
CM-R112大鼠小腦顆粒細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
小鼠癌細(xì)胞;CCC-Ca761-03 小鼠外周血白細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人少突膠質(zhì)細(xì)胞 Human
NCR2 Others Human 人 NKp44 / NCR2 / CD336 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
去氧膽酸鹽枸櫞酸鹽瓊脂250g用于沙門氏菌的分離培養(yǎng)
精氨酸肉湯 250g 用于游泳池中假單胞菌檢測
菌種培養(yǎng)基 Strain Medium(for B.Cereus) 250 用于四環(huán)素檢定中蠟樣芽孢桿菌的培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))
5000ml/瓶incubationmedia5000ml/瓶
NutrientAgar
Skirrow瓊脂28385250g用于空腸彎曲菌的選擇分離培養(yǎng)(GB、ISO),每基礎(chǔ)培養(yǎng)基需添加2支配套試劑。(SR0330)
1901-prf MM-prf 小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基 500 ml incubation media 1901-prf MM-prf 小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基 500 ml
ThioglycollateMedium
BrainHeartInfusionBroth
C.L.E.D培養(yǎng)基添加劑 1ml*5支 每支加入100mlC.L.E.D培養(yǎng)基中
胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂26020250g廣泛用于細(xì)菌的培養(yǎng),特別用于食品中李斯特氏菌的分離培養(yǎng)(GB/T4789.30-20/T0005,I...
巰基醋酸鹽肉湯 (另一USP配方) (CM0391) Oxoid incubation media 巰基醋酸鹽肉湯 (另一USP配方) (CM0391) Oxoid
嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌 生產(chǎn)酸奶 支/瓶
LBNutrientAgar
瓊脂培養(yǎng)基O 250g 用于金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng)。
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