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技術(shù)文章

cytoskeleton特色新產(chǎn)品介紹

閱讀:359          發(fā)布時(shí)間:2024-5-22

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特色新產(chǎn)品

概述

翻譯后乙酰化發(fā)生在賴氨酸殘基的ε-氨基上,作為一種可逆且高度動(dòng)態(tài)的PTM,已知其是多種細(xì)胞事件的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,包括染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)錄、代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)。

主要功能

首乙酰賴氨酸研究者的優(yōu)化試劑盒

分析細(xì)胞或組織樣品中內(nèi)源性或轉(zhuǎn)染蛋白的乙酰化

最完整的乙酰化蛋白質(zhì)圖譜

化學(xué)計(jì)量分析帶來更深入的機(jī)理見解

查看備受關(guān)注的Signal™Seeker工具箱的新增內(nèi)容(如下)

新格式-信號(hào)導(dǎo)引頭乙酰賴氨酸檢測(cè)試劑盒(目錄號(hào)BK163-S.15測(cè)定)

新格式-信號(hào)導(dǎo)引頭乙酰賴氨酸檢測(cè)試劑盒(目錄號(hào)BK163,30個(gè)測(cè)定)

-信號(hào)導(dǎo)引頭乙酰賴氨酸檢測(cè)試劑盒-AAC03(目錄號(hào)BK16430個(gè)測(cè)定)

新格式-乙酰賴氨酸親和珠(AAC0

乙酰賴氨酸親和珠-AAC04

乙酰賴氨酸親和珠(40次測(cè)定)

當(dāng)使用乙酰賴氨酸親和珠時(shí),這種新的通用形式可以進(jìn)行更精確的控制

SigSeekGraphic2

作為Signal Seeker™產(chǎn)品線的一部分,AAC04乙酰賴氨酸親和珠經(jīng)過優(yōu)化,可檢測(cè)賴氨酸乙?;鞍椎膬?nèi)源性水平。乙酰賴氨酸親和珠的新的、通用的形式被提供為已經(jīng)與G蛋白珠化學(xué)綴合的AAC02珠(克隆7B5A1)和AAC03珠(克隆10C4B2.1)。這些珠子可以在1:1的混合物中組合以生產(chǎn)AAC04珠子,并且新的形式在研究乙酰賴氨酸PTMs時(shí)提供了很大的靈活性和準(zhǔn)確性。驗(yàn)證研究表明,這些珠子可以免疫沉淀廣泛的賴氨酸乙?;鞍?,在IP測(cè)定中,重鏈或輕鏈的可檢測(cè)浸出量最小。還提供了一種全面的Signal Seeker™乙酰賴氨酸檢測(cè)試劑盒(BK163),建議首使用。

驗(yàn)證數(shù)據(jù):乙酰賴氨酸親和珠白書

每批親和珠都經(jīng)過質(zhì)量控制,以提供高批次間的一致性,請(qǐng)參閱COA文件。

已驗(yàn)證的應(yīng)用程序

應(yīng)用1:使用AAC02珠、AAC03珠或組合珠(AAC04珠)進(jìn)行總乙酰賴氨酸圖譜的免疫沉淀檢測(cè)——新的AAC04珠格式可以實(shí)現(xiàn)所有3種選擇

使用AAC02珠、AAC03珠和AAC04珠(50µl珠漿)對(duì)用脫乙酰酶抑制劑[TSA1µM)和煙胺(1mM]處理(+)或未處理(-)的Cos-7細(xì)胞的乙?;鞍走M(jìn)行IP處理6小時(shí)。用AAC03-HRP抗體(1:3000)洗脫并通過蛋白質(zhì)印跡分析富集的乙?;鞍椎目倛D譜。使用小鼠IgG珠作為非特異性結(jié)合的對(duì)照(Cat#CIG02)。每個(gè)IP測(cè)定使用1 mg Cos-7裂解物。

應(yīng)用2:使用AAC02珠粒、AAC03珠?;蚪M合珠粒(AAC04珠粒)免疫沉淀靶特異性乙酰化蛋白——所有3種選擇都可以使用新的AAC04珠體形式

AAC03珠粒和AAC02珠粒(50µl珠漿)和1:1混合物(各25µlAAC04珠粒用于脫乙酰酶抑制劑[TSA1µM)和煙胺(1mM]處理(+)或未處理(-)的Cos-7細(xì)胞的乙?;鞍?span>IP 6小時(shí)。使用抗EGFR和抗RhoGDI抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析,并使用LiCor-Empiria軟件對(duì)信號(hào)進(jìn)行定量。還進(jìn)行IP測(cè)定,并對(duì)小鼠IgG對(duì)照珠的信號(hào)進(jìn)行定量(印跡未顯示)。每個(gè)IP使用1 mg裂解物。

應(yīng)用3:從組織樣品中免疫沉淀乙?;鞍?/p>

BlastR緩沖液獲得小鼠組織提取物(肝臟和心臟)。在1mg組織提取物中使用AAC04珠粒(60μg)或mIgG對(duì)照珠粒(#CIG02,60µg)進(jìn)行IP。用SDS-PAGE分離富集的蛋白質(zhì),并用AAC03-HRP1:3000)進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。

bk163_問題

使用AAC04親和珠、細(xì)胞信號(hào)乙酰賴氨酸抗體和免疫化學(xué)乙酰賴氨肽親和珠富集總乙酰賴氨蛋白

使用各種乙酰賴氨酸親和試劑來IP來自用TSA1μM)和煙胺(1mM)處理(+)或未處理(-6小時(shí)的Cos-7細(xì)胞的乙?;鞍?。(1 16.7 ml AAC04珠漿(20μg抗體)。(2 50ml AAC04珠漿(60μg抗體)。(3) 抗乙酰賴氨酸兔單克隆混合物(細(xì)胞信號(hào),按照制造商說明1:100)。(4 ImmuneChem乙酰賴氨酸親和珠(40μg抗體)。(5 ImmunChem乙酰賴氨酸

Signal Seeker®乙酰賴氨酸檢測(cè)試劑盒-AAC03珠子(30次測(cè)定)

信號(hào)導(dǎo)引頭乙?;瘷z測(cè)試劑盒-AAC03珠(30次測(cè)定,免疫沉淀形式)

/包裝

細(xì)節(jié)

SigSeekGraphic2

Signal Seeker™生產(chǎn)線的開發(fā)允許專家和非專家對(duì)關(guān)鍵的調(diào)節(jié)蛋白修飾進(jìn)行簡單分析。全面的Signal Seeker™試劑盒提供了一個(gè)親和珠系統(tǒng),用于從任何給定的細(xì)胞或組織裂解物中分離和富集修飾蛋白。然后使用靶蛋白的一級(jí)抗體通過標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)印跡程序分析富集的蛋白質(zhì)群體。

Cytoskeley提供兩種乙酰賴氨酸檢測(cè)試劑盒,BK163BK164BK163是通用的試劑盒,因?yàn)樗瑑煞N類型的乙酰賴氨酸親和珠,AAC02珠(克隆7B5A1)和AAC03珠(克隆10C4B2.1),它們已與G蛋白珠化學(xué)偶聯(lián)。這些珠子可以以1:1的混合物組合以生產(chǎn)AAC04珠子,并且這種形式在研究乙酰賴氨酸PTM時(shí)提供了很大的靈活性和精度。驗(yàn)證研究表明,這些珠子可以免疫沉淀

產(chǎn)品用途包括

調(diào)查瞬態(tài)調(diào)節(jié)機(jī)制

測(cè)量多途徑成員蛋白的信號(hào)事件

發(fā)現(xiàn)感興趣的蛋白質(zhì)的新修飾

深入了解監(jiān)管機(jī)制

測(cè)量內(nèi)源性或瞬時(shí)表達(dá)的蛋白質(zhì)信號(hào)事件

這些套件有許多應(yīng)用程序,我們?cè)谶@里介紹了概述和有趣的示例:

Signal Seeker®試劑盒BK164僅使用AAC03親和珠,如果已確定AAC03比替代乙酰賴氨酸親和珠Cat#AAC02對(duì)POI的富集更好,則應(yīng)使用該試劑盒。

應(yīng)用1顯示了表皮生長因子受體(EGFR)和RhoGDIIP。在該實(shí)施例中,如果研究EGFRRhoGDI乙?;?,則建議單獨(dú)使用AAC03珠。AAC03珠粒已被證明對(duì)廣泛的乙?;鞍拙哂蟹浅?qiáng)的富集作用(見申請(qǐng)2)。

當(dāng)檢查新的乙酰化狀態(tài)時(shí)

應(yīng)用2:目標(biāo)和總乙?;拭娴臏y(cè)定

使用來自試劑盒BK164的乙酰裂解物親和珠(AAC03珠)從1mg Cos-7細(xì)胞裂解物中免疫沉淀(IP)內(nèi)源性乙?;鞍?。使用HRP標(biāo)記的泛抗乙?;贵w(試劑盒BK164中提供),通過蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)來分析IP的目的蛋白(POI)、EGFRRhoGDI,或總乙酰基體。用HDAC抑制劑TSA1uM)和煙胺(1mM)處理(+)或未處理(-)賴氨酸6小時(shí)。

試劑盒內(nèi)容

乙酰賴氨酸試劑盒包含以下成分:

裂解和蛋白質(zhì)定量步驟IP和預(yù)澄清步驟洗滌步驟洗脫步驟西方步驟

BlastR™裂解緩沖液

BlastR™稀釋緩沖液

BlastR™過濾器

蛋白酶抑制劑雞尾酒

HDAC抑制劑雞尾酒

Precision Red™蛋白質(zhì)測(cè)定試劑

乙酰賴氨酸親和珠(AAC03珠)

IP控制珠

BlastR™沖洗緩沖液

旋轉(zhuǎn)柱

珠子洗脫緩沖液

化學(xué)發(fā)光試劑A

化學(xué)發(fā)光試劑B

抗乙酰賴氨酸HRP抗體

在這一研究領(lǐng)域可以嘗試的其他實(shí)驗(yàn)包括:

參與靶蛋白調(diào)節(jié)的乙?;负?span>HDAC酶的藥理學(xué)研究。

研究在各種不同生長因子或藥物治療下的乙?;饔谩?/p>

檢查乙?;械鞍着c其下游效應(yīng)物的相互作用。

檢查乙酰化和其他靶蛋白的PTM之間的串?dāng)_。

 

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