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產品貨號	產品名稱	品牌
11422-1-AP	Marcksl Antibody	Proteintech
10934-1-ap	Cyclin D2 Antibody	proteintech
10586-1-AP	STMN2 Antibody	proteintech

MARCKSL1抗體1出版物

兔多克隆| 貨號：11422-1-AP

物種特異性：人類，老鼠

在以下位置檢測到正白平衡：人腦組織

在以下方面檢測到陽性IHC：人肺癌組織，人肝癌組織，人胰腺癌組織

 

注意：建議使用pH 9.0的TE緩沖液進行抗原回收；（*）或者，可以用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進行抗原修復

推薦稀釋度：

白平衡：1：500-1：1000

IHC：1：20-1：200

取決于樣品，在“驗證”選項卡中檢查數據

產品信息：

資源：兔子

純化方法：抗原親和純化

同型：IgG抗體

存儲：具有0.1％疊氮化na和50％甘油pH 7.3的PBS。儲存于-20 Ô C. 等分是不必要的-20 ö下儲存。

免疫原信息：

免疫原MARCKSL1融合蛋白Ag1967

全名：類馬克1

計算分子量：195aa，20 kDa

觀察分子量：48 kDa的

GenBank登錄號：BC007904

基因編號（NCBI）：65108

基因符號MARCKSL1

同義字F52，Mac MARCKS，MACMARCKS，MARCKS like 1，MARCKS like protein 1，MARCKS related protein，MARCKSL1，MLP，MLP1，MRP

背景 ：

MARCKS樣蛋白1（MARCKSL1）在神經組織中廣泛表達，也稱為MARCKS樣蛋白（MLP）或MARCKS相關蛋白（MRP），屬于MARCKS家族，它是PKC的高酸性豆蔻酰化家族底物廣泛分布在包括巨噬細胞在內的各種細胞類型中。由于SDS凝膠上的異常遷移或磷酸化，該蛋白質的計算分子量為20 kDa，表觀分子量為42-48 kDa。MARCKSL1的遺傳破壞導致神經管閉合缺陷，依賴于肌動蛋白功能，細胞形狀和細胞遷移的協調控制的事件。人們認為MARCKSL1調節肌動蛋白的細胞骨架，從而參與主要的細胞反應，例如吞噬作用，分泌，運動，有絲分裂和膜運輸。

 

免疫印跡和免疫沉淀方案：

細胞裂解液的制備：

將RIPA緩沖液添加到細胞中（100μL放入35 mm皿中，200μL放入60 mm皿中，500μL加入100毫米培養皿），同時將培養皿置于冰上。刮擦細胞并輕輕搖動懸吊在冷藏室中的搖桿或定軌振動器上15分鐘裂解細胞。用浴超聲儀在冰水中超聲處理，直樣品不再粘稠。在4℃下以12000 g的速度離心細胞5分鐘以去除沉淀。移動上清液換一個新鮮的管。細胞裂解物的終濃度將為2-3μg/μL。對于白平衡，添加4×SDS檔緩沖裂解液1×SDS終濃度。

免疫印跡：

1.煮沸10分鐘后，將20-50μL樣品上樣SDS PAGE。對于大多數蛋白質，建議每泳道上樣量使用30-80μg總裂解物蛋白質，因為細胞中80％的蛋白質種類的濃度非常低。

2.將凝膠浸入蛋白質印跡轉移緩沖液中。大多數情況下建議使用PVDF膜蛋白質。將膜浸入甲醇中1-2分鐘，然后將膜浸入轉移緩沖液10分鐘，然后將其放在厚厚的緩沖液濾紙疊上。然后用另一疊浸有緩沖液的濾紙覆蓋它。掩蓋轉移儀器。凝膠應在膜的負極。

3.以1 mA / cm2的電流運行90分鐘。

4.將膜在封閉緩沖液中于室溫下孵育1小時或過夜在4℃。用洗滌緩沖液洗滌膜3×5分鐘。

5.用封閉緩沖液稀釋一抗。在37℃下孵育膜1.5小時室內溫度。用洗滌緩沖液洗滌膜3×5分鐘。

6.用封閉緩沖液稀釋二抗。在37℃下孵育膜1小時室內溫度。用洗滌緩沖液洗滌膜3×5分鐘。

7.用洗滌緩沖液洗滌膜3×10分鐘。

8.用ECL顯色。

免疫沉淀：

1.將200-350μL細胞裂解液（包含1-3 mg總蛋白）轉移到微量離心管中。

2.向細胞（或預先清除的）裂解物中添加150-300μL孵育緩沖液和1-4μg一抗。jia抗體濃度應通過滴定確定。用對照IgG建立陰性對照實驗（對應于原發性抗體來源）。輕輕搖動在4℃下孵育2-4小時或過夜。

3.加入50μLProtein A或G Sepharose微珠漿液以捕獲免疫復合物。將混合物在4℃輕輕搖動1-4小時。

4.取下端蓋，從旋轉柱底部釋放上清液。必要時，重懸磁珠混合物以提高流速。

5.用含1x蛋白酶抑制劑的1x TBST將珠子洗滌5次。后之后洗滌，將旋轉柱在4℃下于500 g離心30秒，然后收集上清液并丟棄。

6.將離心柱放在新的微量離心管中，合并洗脫液。洗脫沉淀用40μl洗脫緩沖液在4℃下于8000-10000g離心1分鐘，重復一次用新的40μl洗脫緩沖液洗脫。

7.在洗脫液中加入10μl堿中和緩沖液和30μl4×樣品緩沖液，在95-100℃5分鐘。將其保存在-20℃或在SDS-PAGE上加載20-40μl，并通過WB。

組織培養細胞免疫熒光的協議：

1.在小的圓形玻璃蓋上培養細胞。

2.用4％PFA或有機溶劑在4℃固定細胞20分鐘（如果您使用固定的有機溶劑，則只需跳過第3步，然后直接進行第4步）。

3.將玻璃杯準確轉移5分鐘0.2％Ttiton X-100-PBS中。

4.在室溫下用BSA-PBS封閉細胞1h，或在4℃下過夜。

5.在蓋玻片上加入50μL特異性一抗，并在室溫下孵育1小時在潮濕的容器中加熱溫度。用PBS清洗蓋板三遍。

6.在每個蓋玻片上加入50μL熒光標記的第二抗體，并在黑暗中于潮濕的容器中于室溫下孵育1小時。

7.將蓋玻片安裝在15％的甘油中或少量載玻片上。

8.用指甲油在邊緣上密封蓋玻片。

石蠟包埋的組織切片的免疫組織化學方案：

1.在2種二甲苯中對載玻片進行脫蠟處理，一次40分鐘，另一次20分鐘。

2.將玻片轉移到100％酒精，95％酒精，80％酒精，60％酒精和ddH2O中每次5分鐘。

3.將載玻片放在裝有抗原回收緩沖液的容器中，并在中間放置微波以進行操作。幾分鐘（700 W烤箱），讓回收溶液在室溫下冷卻。

4.用TBS沖洗2×5分鐘。

5.通過在3％H2O2溶液中孵育切片來阻斷內源性過氧化物酶活性ddH2O 10分鐘。

6.用TBS沖洗2×5分鐘。

7.在室溫下在TBS中封閉5-10％的山羊血清30分鐘。

8.排干幻燈片幾秒鐘（請勿沖洗）并擦拭圓形部分。

9.應用在TBS中組成的一抗。在室溫或4℃下孵育1小時過夜。

10.用TBST沖洗2×5分鐘。

11.在室溫下應用Envision二抗30分鐘。

12.用TBS沖洗2×5分鐘。

13.在室溫下用發色團（DAB）顯影，在顯微鏡下觀察。

14.用自來水沖洗5分鐘。

15.在市長的蘇木浴中復染30-60秒。

16.在水浴中洗7-8次，然后自來水3分鐘。

17.用60％，80％，95％和100％的酒精分別脫水5分鐘。

18.轉移到二甲苯中5分鐘。通風30分鐘。

19.安裝

 

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