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PrimeSTAR HS DNA聚合酶

高保真PCR

 

PrimeSTAR HS DNA聚合酶是一種新型的高保真DNA聚合酶，可高效擴增大型DNA產物（人基因組DNAgao8.5 kb；λDNAgao22 kb）。由于強大的3'→5'核酸外切酶活性，其卓yue的校對能力可實現其出色的性能。抗體介導的熱啟動（HS）功能可提高特異性，從而減少背景，并證明在要求苛刻的克隆和測序應用中非常有用。PrimeSTAR HS  具有靈活方便的格式：

 

各個組件-Primeme HS HS  DNA聚合酶配有5X PrimeSTAR Buffer（含Mg 2+）試管和dNTPs管。

2X PCR預混液-包含PrimeSTAR HS DNA聚合酶，反應緩沖液和dNTP的預混液，用于簡單方便的PCR設置和少的移液步驟。

通過直接測序分析可以計算PrimeSTAR HS DNA聚合酶的保真度，與其他常用的間接表型分析（例如lacI）相比，可以提供對摻入錯誤率的更真實估計。由于固有的致死和沉默突變，其他酶供應商經常使用的計算方法（如lacI）容易出錯。

 

PrimeSTAR HS DNA聚合酶因其*的啟動效率而還具有出色的擴增效率和快速的反應時間。使用僅5–15秒的短退火時間即可實現高特異性擴增。

 

對于ju挑戰性的PCR應用，PrimeSTAR HS的增強版本可輕松擴增富含GC的序列，甚具有更高的保真度，并適用于長距離PCR：

 

具有GC緩沖液的PrimeSTAR HS可對困難的富含GC的樣品（75％或更高）提供可靠的高保真擴增。

PrimeSTAR Max產品提供了所有Takara Bio產品gao的保真度和kuai的擴展時間。

PrimeSTAR GXL產品具有高保真度，并具有擴增長且富含GC或AT的目標的能力。

 減

R010B     PrimeSTAR®HS DNA聚合酶      1,000伙 

一種高保真熱啟動（HS）PCR DNA聚合酶，由于其強大的3'5'核酸外切酶活性而具有出色的校對能力。PrimeSTAR HS DNA聚合酶可有效擴增高達8.5 kb的人類基因組DNA靶標或22 kb的lambda DNA。酶隨附了優化的緩沖液（Mg 2+加）和dNTP混合物的單獨試管。貓。＃R010B包含4個Cat。＃R010A。請參考目錄。＃R010A了解完整的產品文檔和資源。

R010A    PrimeSTAR®HS DNA聚合酶      250伙                  *     

一種高保真熱啟動（HS）PCR DNA聚合酶，由于其強大的3'5'核酸外切酶活性而具有出色的校對能力。PrimeSTAR HS DNA聚合酶可有效擴增高達8.5 kb的人類基因組DNA靶標或22 kb的lambda DNA。酶隨附了優化的緩沖液（Mg 2+加）和dNTP混合物的單獨試管。

 

總覽

高精度和強大的核酸外切酶活性，導低的錯誤率（每250 kb僅12個錯誤）

與標準Taq聚合酶相比，擴增效率更高

即使使用富含GC的模板也具有出色的性能

對變化的反應條件具有高度的耐受性（單個PCR循環方案可用于擴增大小不同的產物）

使用人類基因組DNA擴增靶標8.5 kb，使用大腸桿菌基因組DNA 擴增靶標10 kb，使用lambda DNA 擴增靶標22 kb

由于提高了啟動效率，反應時間短

熱啟動PCR酶可防止由于錯誤的引物或引物消化而在反應組裝過程中發生錯誤的引發事件

更多信息

應用領域

高保真PCR

cDNA文庫的擴增

用于蛋白質表達的cDNA克隆

定點誘變和突變基因分型（例如，SNP分析）

有關保真度比較的注意事項

我們使用測序分析來確定摻入錯誤率，因為大多數需要高保真擴增的研究人員都執行以下操作：PCR，克隆和測序。因此，通過直接序列分析確定錯誤率與大多數研究人員在自己的應用程序中使用的方法非常接近。請注意，使用不同保真度測量方法（例如，直接測序，Kunkel方法，Cline方法，lac I方法）獲得的值不能直接產生可比數據。

 

純度

將0.6 µg超螺旋pBR322 DNA或lambda DNA與10個單位的酶在74°C孵育1小時后，既未檢測到切口，內切核酸酶，也未檢測到核酸外切酶活性。

 

存儲

運輸和存放于–20°C。避免反復凍融和劇烈攪拌。解凍后，分配到PCR管中并儲存在–20°C。

 

性能

使用λDNA（擴增的片段：8、10、12、15 kb）和人基因組DNA（擴增的片段：0.5、1、2、4、6、8 kb）作為模板，通過單片段PCR證實了酶促性能。

 

PCR產品

使用PrimeSTAR HS DNA聚合酶獲得的大量PCR產物的末端會變鈍。結果，PCR產物可以直接克隆到平末端載體中。如有必要，在克隆前將PCR產物磷酸化。

 

批量，自定義和OEM信息

如果您對批量購買，定制包裝，定制配方（包括無甘油和高濃度）或合作機會感興趣，請聯系我們，以討論您的需求或訪問我們的OEM頁面以提交查詢。

 

其他產品信息

有關存儲條件，產品組件和技術規格的信息，請參閱產品的分析證書。請參閱套件組件列表以確定套件組件。分析證書和試劑盒組件列表位于“文檔”選項卡下。

 

3.0常見問題

3.1：PrimeSTAR™建議的退火條件是什么？

Takara建議以下退火條件：

初始退火溫度應以55°C為起點。

退火時間：由于PrimeSTAR具有很高的灌注效率，因此將退火時間設置為5秒。或15秒

根據Tm值。較長的退火時間會導致涂污。

當Tm *＞ 55℃時：5秒。

當Tm * ＜55℃時：15秒。

使用以下方法計算Tm值：* Tm計算公式：Tm（°C）= 2（NA + NT）+ 4（NC + NG）-5

僅對<25個堿基的引物使用此方法。對于引物> 25個堿基，將退火溫度設置為5秒。

注意：請按照提供的指導進行操作。

3.2：何時應使用3步與2步PCR循環方案？

通常，建議使用三步協議。但是，在瓊脂糖上觀察到產品涂抹時

凝膠電泳，或使用Tm> 70°C的引物時，建議使用兩步操作方案。

3.3：瓊脂糖凝膠電泳后，我觀察到我的PCR產物有污跡。問題是什么？

通常在PCR條件不理想時會觀察到PCR產物的涂片。嘗試使用以下一項或多項建議來修改PCR循環條件：

-減少退火時間，例如如果以15秒進行退火，則將時間減少到5秒。

-將退火溫度提高到58-65°C。

-從3步切換為2步循環協議。

3.4：我的PrimeSTAR™反應中獲得的PCR產物數量很少，觀察到很少或沒有觀察到

產品在我的瓊脂糖凝膠上。如何增加產量？

通常，PCR產物量少是引物與DNA模板退火不正確的結果。嘗試修改

您的退火條件：

-延長退火時間，例如如果執行退火5秒鐘，則將時間延長到15秒鐘，或者

將退火溫度降50-53°C。

3.5：PrimeSTAR™反應中建議的模板DNA推薦量是多少？

PrimeSTARTM反應中使用的模板DNA的合適量隨DNA來源的不同而不同：

人類基因組DNA 5-500 ng

大腸桿菌基因組DNA 100 pg -100 ng

λDNA 10 pg-10 ng

質粒10 pg-1 ng

 

3.6 dNTPs的濃度可以修改嗎？

過量的dNTP具有螯合作用，較高的dNTP濃度會降低反應混合物的有效Mg2 +濃度。隨附的5X PrimeSTAR™緩沖液可提供1 mM的終Mg2 +反應混合物終濃度

優化后的dNTP終濃度為200μM。因此，dNTP的濃度不應

被修改。

3.7：我的PrimeSTAR™產品的瓊脂糖凝膠電泳應使用哪種緩沖液？

建議將TAE Buffer用于使用PrimeSTAR™獲得的擴增產物的瓊脂糖凝膠電泳

HS DNA聚合酶。使用TBE緩沖液可能會導致DNA條帶模式在凝膠底部擴大。

3.8：PrimeSTAR™產生哪種類型的PCR產物末端？

用PrimeSTAR™HS DNA聚合酶擴增的所有PCR產物均具有平末端。因此，他們可以直接

可克隆到平端載體中（如有必要，可在克隆前進行磷酸化），但不能克隆到T載體中。

3.9：PrimeSTAR™產品在進行限制性酶切消化之前是否需要任何特殊處理？

在對擴增的PCR產物進行限制性酶切消化之前，通過苯酚/lv仿萃取從反應混合物中除去所有痕量的PrimeSTAR™HS聚合酶。特別是對于3'突出的限制酶，例如

Pst I，這些酶產生的3'突出末端，在消化過程中可能會被3'-5'核酸外切酶活性刪除

剩余量的PrimeSTAR™HS聚合酶。

3.10：我可以在測序反應中直接使用PrimeSTAR™產品嗎？

Takara建議在直接測序之前，先用酚/lv仿提取PCR產物，以確保滅活任何剩余的3'-5'核酸外切酶聚合酶活性

 

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