精品亚洲a∨无码专区毛片-精品亚洲aⅴ无码午夜在线-精品亚洲aⅴ无码午夜在线观看-精品亚洲aⅴ无码一区二区三区-精品亚洲aⅴ无码专区毛片-精品亚洲aⅴ在线

靶點科技(北京)有限公司

肝臟細胞分類組成和肝臟巨噬細胞分離富集方案

時間:2024-6-15閱讀:1041

1.肝臟細胞分類

肝臟是人體最大腺體,包含兩大類細胞,分別是肝實質細胞(PC)肝非實質細胞(NPC)

肝臟實質細胞包括了肝細胞和膽管細胞。肝細胞約占所有肝細胞的70%,并負責大部分肝代謝功能。

肝非實質細胞約占總肝細胞的30%。肝非實質細胞包括巨噬細胞(Kupffer cells, KC)比例約35%、肝竇內皮細胞(Liver endothelial cells, LEC)比例約45%和肝成纖維細胞(Liver fibroblasts)。也就是說巨噬細胞和肝竇內皮細胞一起占據了80%。


肝臟細胞分類組成和肝臟巨噬細胞分離富集方案



2.肝臟內不同細胞分離富集

2.1肝組織灌洗:一方面可以去除肝細胞的紅細胞,并通過膠原蛋白酶灌注提高肝組織的利用率,另一方面可以收集肝臟血液中的白細胞等其他免疫細胞。肝臟灌洗替代的方式可以將肝臟組織剪成2-4 毫米的小塊,加入適量的酶并在最佳溫度(通常為 37°C)下孵育適當的時間,間歇混合。最終將組織消化后通過篩網過濾細胞懸浮液。

2.2根據肝臟中各細胞的物理特性對肝內細胞進行分離和提純。

例如由于粒徑的差異,肝細胞的粒徑普遍在100um左右,而KC、LEC、成纖維細胞的粒徑普遍小于100um,因此可以40um或70um的細胞篩網篩去除不需要的肝細胞,也可以使用50g離心5min將肝細胞(會沉淀)和肝臟其他細胞(繼續懸浮)分離開來。由于各細胞的密度差異,死細胞或細胞殘渣由于密度小,在層析液中移動慢,因此使用不同密度梯度的層析液可以有效地分離死細胞和肝臟內各成分的活細胞。

2.3根據肝臟中各細胞的黏附速度進行分離

肝臟中KC與其他非實質細胞相比黏附速度很快,因此將肝臟非實質細胞提取放置在細胞培養箱中約30min,KC就會貼壁,而其他類型的細胞不會貼壁,此時吸走細胞培養基,留在培養瓶底的大多數為KC。反復操作可利于收集更多KC。

2.4根據肝臟細胞中各細胞的黏附能力進行分離

肝臟中成纖維細胞的黏附能力明顯強于肝臟中其他細胞。因此如果細胞懸液中僅有成纖維細胞和目標細胞,例如LEC或KC等。可以使用胰酶短時間消化后立即收集細胞,反復多次操作利于提高目標細胞的比例。

2.5根據肝臟細胞中各細胞的生長速度輔助提純

肝臟中成纖維細胞的生長能力很強,如果樣本分離不純使得目標細胞中摻雜了成纖維細胞,可以使用含1%FBS培養基限制成纖維細胞的生長,當細胞密度大于50%后,再通過胰酶快速消化的方法純化目標細胞。


3.肝臟內不同細胞分離的器械、試劑或耗材

3.1 器械:準備鑷子、刀片、留置針、50ml注射器/流泵(強烈建議用恒流泵)、外科線、外科剪、轉運盒、冰塊。

3.2 試劑:DMEM培養基、RPMI培養基、Hanks液、PBS、血清、肝細胞培養基(或購買地塞米松、胰島素、白蛋白、谷氨酰胺等)、EDTA/肝素、雙抗/三抗、膠原蛋白酶Ⅳ型、層析液Percoll、乙醇。

3.3 耗材:培養皿、培養瓶、細胞篩網、移液管、移液槍、50ml和15ml離心管。


4.肝臟灌注,密度梯度離心方法Intrahepatic macrophages isolation

Primary mouse macrophages were isolated from the mouse liver. Briefly, mouse livers were first perfused in situ with Ca2+ and Mg2+-free Hank’s balanced salt solution (HBSS) containing 0.5 mM EGTA through the portal vein and then again with HBSS containing 0.05% collagenase IV. The digested livers were torn open and then gently separated with forceps until they were in suspension. The cell suspensions were filtered with a 70-μm cell filter, and the hepatocytes were removed by differential centrifugation (50×g, 5 min; 72×g, 5 min). To obtain nonparenchymal cells, the supernatant was collected and centrifuged further (300×g, 5 min; 650×g, 7 min). The pellets from both centrifugation steps were pooled and resuspended in DMEM containing 2% fetal bovine serum (FBS). The cell suspension was transferred to a 25%/50% Percoll gradient and centrifuged at 1200×g for 30 min without braking. The macrophage fraction was enriched in the interface between the 25% and 50% Percoll layers. Macrophages were purified by using a mouse F4/80 positive selection EasySep kit (EasySep™ Mouse F4/80 Positive Selection Kit; 100-0659) in accordance with the manufacturer’s instructions.


肝臟細胞分類組成和肝臟巨噬細胞分離富集方案


會員登錄

X

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~

以上信息由企業自行提供,信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業負責,化工儀器網對此不承擔任何保證責任。

溫馨提示:為規避購買風險,建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。

撥打電話
在線留言
主站蜘蛛池模板: 免费看成人国产一区二区三区| 国外卡一卡二卡三免费专区| 国产日本一线在线观看免费| 偷偷色在线男人天堂| 久996视频精品免费观看| 国产一区二区三区影院| 亚洲A片无码成人精品区| 国内久久久久久久久久| 国产成人亚洲欧美激情| 欧洲无码八A片人妻少妇| 国产精品人妻一区夜夜爱| 波多野结衣教师中文字幕| 久久亚洲av无码精品色麻豆夜| 97热在线| 7777精品伊久久久大香线蕉 | 精品国产一区二区三区四区勃大卷| 国产激情在线视频| 强摸秘书人妻大乳BD| 国产激情无码激情A片软件| 91香蕉国产亚洲一二三区| 精品一区二区三区视频免费观看| 亚洲制服丝袜中文字幕无码| 日本无码精品一区二区三 | 五月天丁香久久| 成人av无码区二区三区| 久久艳妇乳肉豪妇荡乳A片PY| 婷婷91区二区三区| 一区二区精品日韩欧美在| 国产中文字幕乱人| 午夜视频在线观看国产| 在线观看精品国产福利片| 成人亚洲欧美日韩在线| 久久综合干| 成人拔插视频| 国产成人av乱码在线播放| 亚洲 欧美 影音先锋| 国产精品三级电影| 日韩人妻av无码综合一区| 色爰情人网站| 干b视频在线观看| 男女做爰全A片免费的看|