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蘇州千舍生物科技有限公司

細胞培養中常見的污染以及解決方案

時間:2020-4-23閱讀:2762
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細胞培養中常見的污染情況總結如下

常見的污染如下:

1、細菌:細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,培養液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況,是否在高壓滅菌時放氣時間足夠,壓力足夠!尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品,連續兩次污染的話有可能造成儲存液污染,一定要注意!下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象!可在培養液中加相應的抗生素處理

2、霉菌:培養液是清亮的,倒置顯微鏡下無雜質,37度孵箱培養2-3天,仍清亮,但出現絮狀雜質,鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,細胞仍可生長,但時間長之后,細胞的活力狀態變差,

用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內,再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有細胞暫時轉移,采用過氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時,使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后,再移入細胞。孵箱應定期清潔(2月左右),尤其在多雨的季節。

其它培養箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照。預防霉菌污染,可在培養基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素D或雙抗;但細胞一旦污染,很難挽救,制霉菌素或放線菌素D或雙抗都于事無補,建議舍棄該污染細胞。,將環境*消毒,如果所有細胞都污染,可能是系統污染,檢查一下培養基和器材,如果只是個別污染,可能是操作問題,就要注意操作

3、支原體:黑色的,好象多為多形,培養液一般培養液一般會渾濁,原體感染,國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后,細胞病變不很明顯,只是慢慢去。用泰樂菌素,獸用支原體病的藥,但可用于細胞培養,無任何不良反應。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養液培養6天或連續傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。

4、黑蛟蟲:可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態良好,且觀測到的運動物無明顯增多,且培養液顏色、透明度無明顯變化,可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象。對細胞生長狀態不會有明顯影響,在細胞增殖旺盛之后會自然消失,除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話,可以增加細胞的種板密度,以提高細胞的生存率。

5、真菌:一般培養液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細胞碎片分不清,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢,不象細菌那么容易被發現,但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了,也很難救活了。

6、原蟲:培養液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多,輕微活動,細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態不好,邊緣不清楚,細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。這種共生是非常普遍的,但他們的數量小,細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長,只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長,終形成惡性循環。

污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環境問題等等

關于培養基的無菌狀況,取培養基至培養瓶中(不加細胞),37度試培養一段時間后觀察。如果沒有細菌生長 就是操作的問題。也可以在培養基中事先加入雙抗(硫酸鏈霉素和氨芐青霉素)。但雙抗有時會影響細胞的狀態,所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗,以避免影響實驗結果。

1、孵箱應定期用三氧機消毒 或者 紫外光照射,并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水

2、超凈臺\取材\器材\培養液\培養瓶\操作等因素

3、超凈臺的風機不能過大,風機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染

4、無菌室經甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的氨水噴灑中和,約幾小時即可進入操作

細胞庫細胞

SHG-44 人膠質瘤細胞
SH-SY5Y人神經母細胞瘤細胞
SHZ-88大鼠乳腺癌細胞
SiHa人子宮頸鱗癌細胞
SK-BR-3人乳腺癌細胞
SK-Hep-1人肝癌細胞
SK-MES-1人肺鱗癌細胞
SK-N-SH人神經母細胞瘤細胞
SK-OV-3人卵巢癌細胞
SMMC-7721人肝癌細胞
SP2/0小鼠骨髓瘤細胞
SPC-A-1人肺癌細胞
ST豬睪丸細胞
STO小鼠胚成纖維細胞
SVEC4-10小鼠淋巴結內皮細胞
SV-HUC-1人膀胱上皮永生化細胞
SW480人結腸癌細胞
SW579人甲狀腺鱗癌細胞  
SW620人結腸癌細胞
SW626人卵巢癌細胞
T24人膀胱移行細胞癌細胞
T-47D人乳腺管癌細胞
T84人結腸腺癌肺轉移細胞
Tca-8113人舌鱗癌細胞
TE-1人食管癌細胞
TF-1人血液白血病細胞
THP-1人髓系白血病單核細胞
TM3小鼠睪丸間質細胞
TSCCa人舌鱗癌細胞
U-2 OS人骨肉瘤細胞
U251人神經膠質瘤細胞
U-87 MG人腦星形膠質母細胞瘤細胞
U-937人組織細胞淋巴瘤細胞
V79倉鼠肺細胞
VCaP人前列腺癌細胞
Vero非洲綠猴腎細胞
WI-38人胚肺細胞
WISH人羊膜細胞
Y1(Y-1)小鼠腎上腺皮質細胞
YAC-1小鼠淋巴瘤細胞
ZR-75-1人乳腺癌細胞
ZR-75-30人乳腺癌細胞
16HBE人支氣管上皮樣細胞
801-D 人巨細胞性肺癌細胞
MC3T3-E1 Subclone 24小鼠胚胎成骨細胞前體細胞
A2 人腺樣囊性癌細胞
A-427人肺癌細胞
A-498人腎癌細胞
A875人黑色素瘤細胞
AM 人腺樣囊性癌細胞(高轉移)
BC-009人乳腺癌細胞
BC-019人乳腺癌細胞
BC-020人乳腺癌細胞
BC-021人乳腺癌細胞
BC-022人乳腺癌細胞
BE(2)-M17人神經母細胞瘤細胞
L6565小鼠白血病克隆細胞系
C918人眼脈絡黑色素瘤細胞
CAL 27人舌鱗癌細胞
LS 180人結腸腺癌細胞
CNE-2Z 人鼻咽癌細胞
COLO 201人結直腸腺癌細胞
CW-2人結腸癌細胞
CRT 人神經膠質瘤細胞
D283 Med人腦髓母細胞瘤細胞
EA.hy926人臍靜脈細胞融合細胞
ECV-304人臍靜脈內皮細胞
EJ 人膀胱癌細胞
NCI-H1395人肺腺癌細胞
H-97 人高轉移肝癌細胞
HCC 94(HCC941122)人子宮鱗癌細胞(高分化)
HCCLM3人高轉移肝癌細胞
UMNSAH/DF-1雞胚成纖維細胞
HEL 人紅白細胞白血病細胞
HELF 人胚肺成纖維細胞
HO-8910PM 人高轉移卵巢癌細胞
Ishikawa 人子宮內膜癌細胞
CTLA4 Ig-24中國倉鼠卵巢細胞
3T6-Swiss albino小鼠胚胎成纖維細胞
M1小鼠白血病細胞
M14 人黑色素瘤細胞
MA-891 小鼠乳腺癌高轉移細胞
MDA-MB-435 人乳腺癌高轉移細胞
MDA-MB-468 人乳腺癌細胞
MKN-28人胃癌高轉移細胞
MKN-45人胃癌細胞
MuM-2B 人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞
MuM-2C 人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞
MV3 人黑色素瘤細胞
MX-1 人乳腺癌細胞
Y3-Ag 1.2.3大鼠骨髓瘤細胞
NCI-H1975人肺腺癌細胞
NCI-H460 人大細胞肺癌細胞
NCI-H661人大細胞肺癌細胞
M-NFS-60 小鼠髓性白血病淋巴細胞/小鼠白血病G-CSF依賴性細胞
PA319 人大腸癌細胞
PATU8988 人胰腺癌細胞
PC-3M 人前列腺癌細胞
SF-295 人XG惡性膠質瘤細胞
SMC-1人胸膜瘤細胞
SW1116人結腸腺癌細胞
TE-13 人食管癌細胞
TG-905 人腦膠質母細胞瘤細胞
VE 人血管內皮細胞
293E人胚腎細胞(EBNA1基因修飾)
293ET人胚腎細胞(SV40T和EBNA1基因修飾細胞)
293FT人胚腎細胞
2V6.11人胚腎細胞
A3人T淋巴細胞白血病細胞
A7r5大鼠胸大動脈平滑肌細胞
AML-193人急性單核細胞白血病單核細胞
B16-F1小鼠黑色素瘤細胞
B16-F10小鼠皮膚黑色素瘤細胞
BC3H1小鼠腦瘤細胞
BEL-7405人肝癌細胞
Beta-TC-6小鼠胰島素瘤胰島β細胞
BNL 1ME A.7R.1小鼠肝上皮細胞
BT-20人乳腺癌細胞
C3H/10T1/2, Clone 8小鼠胚胎成纖維細胞
Caki-2人腎透明細胞癌細胞
Calu-6人肺退行性癌細胞
CEM/C1人急性淋巴細胞白血病細胞
Chang liver人張氏肝細胞
Detroit 562人咽頭癌胸水轉移細胞
CTLL-2小鼠T細胞
Dami人巨核細胞白血病細胞
E.G7-OVA小鼠T淋巴瘤細胞
EB-3人Burkitt淋巴瘤細胞
EBTr (NBL-4)牛胚氣管細胞
FC33人胚胎腎細胞(Asp-2基因修飾)
FO小鼠骨髓瘤細胞
G1發綠色熒光的小鼠胚胎干細胞
G-401人腎癌Wilms細胞
GH3大鼠垂體瘤細胞
H22小鼠肝癌細胞
H4-II-E-C3大鼠肝癌細胞 
HA人羊膜細胞
OKT 11小鼠雜交瘤細胞(抗CD2)
HB611人肝癌細胞
HBE人支氣管上皮樣細胞
HCC38人乳腺導管癌細胞
Hce-8693人盲腸腺癌細胞(未分化)
HeLa 299人宮頸癌細胞
HeLa S3人宮頸癌細胞
Hep B1.2人肝癌細胞
HFF-1人包皮成纖維細胞
hFOB 1.19SV40轉染人成骨細胞
HFSF人胚胎眼鞏膜成纖維細胞
HFT-8810人胎兒胸腺細胞株
HGF-1人牙齦成纖維細胞
HHCC人肝癌細胞
HKC人肝癌細胞
HLF-a人肺細胞
HOS人骨肉瘤細胞
HPAC人胰腺腺泡上皮癌
HS 683人腦膠質瘤細胞
Hs68人男性正常頭細胞
HuT 78人T淋巴細胞白血病細胞
HuTu-80人十二脂腸腺癌
IAR20大鼠肝細胞
IM-9人外周血B淋巴細胞
INS-1大鼠胰島細胞瘤細胞
IR983F大鼠骨髓瘤細胞
J774A.1小鼠單核巨噬細胞
K7M2 wt小鼠骨肉瘤成骨細胞
KATO III人胃癌細胞
KiMA人胚腎上皮細胞
KP-N-NS人腎上腺神經母細胞瘤細胞(腦轉移)
L Wnt-3A小鼠皮下結締組織細胞
LA795小鼠肺腺癌細胞
LLC-WRC 256大鼠腹水癌細胞
MC3T3-E1  Subclone 14小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14
MCF 7B人乳腺癌細胞
MDA-MB-157人乳腺癌細胞
MDA-MB-175VII人乳腺導管癌細胞
MDA-MB-415人乳腺癌細胞
MDA-MB-436人乳腺癌細胞
MDA-MB-468-06人乳腺癌細胞
MFC-GFP小鼠前胃癌細胞(綠色熒光蛋白標記)
MPC-11小鼠漿細胞瘤
MS751人子宮頸表皮癌細胞
NCI-H157人非小細胞肺腺癌細胞
NCI-H1688人典型小細胞肺癌細胞
NCI-H1703人肺鱗癌細胞
NCI-H205人腎上腺腺瘤細胞
NCI-H2087人非小細胞肺腺癌細胞
NCI-H209人小細胞肺癌細胞
NCI-H2170人肺鱗癌細胞
NCI-H2227人小細胞肺癌細胞
NCI-H226人肺鱗癌細胞
NCI-H23人非小細胞肺癌細胞
NCI-H2452人間皮瘤細胞
NCI-H295R人腎上腺皮質腺癌細胞
NCI-H358人非小細胞肺癌細胞
NCI-H446人小細胞肺癌細胞
NCI-H520人肺鱗癌細胞
NCI-H524人非小細胞肺癌細胞
NCI-H596人肺腺鱗癌細胞
NCI-H716人結直腸腺癌細胞
NCI-H838人非小細胞肺癌細胞
NCTC 1469小鼠正常肝細胞
NEC人食管癌細胞
P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]小鼠骨髓瘤細胞
P3X63Ag8.653小鼠骨髓瘤細胞
PA-1人卵巢畸胎瘤細胞
PC-12(未分化)大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化)
PC-3M-2B4人前列腺癌低轉移細胞株
PC-3M IE8人前列腺癌高轉移細胞株
PLC/PRF/5人肝癌亞力山大細胞
Psi2 DAP小鼠胚胎成纖維細胞
QG-56人肺扁平上皮癌細胞
QGY-7703人肝癌細胞
QSG-7701人肝細胞
R 1610倉鼠肺細胞
RAG小鼠腎腺癌細胞
RBL-1大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞
RIN-m5f大鼠胰島β細胞瘤細胞
RK1大鼠腎細胞
RKO-AS45-1人結腸癌轉基因細胞
RKO-E6人結腸癌轉基因細胞
RL1大鼠肺成纖維樣細胞
RM1大鼠肌肉成纖維樣細胞
Romas人淋巴瘤細胞
RS1大鼠皮膚成纖維樣細胞
RT4人膀胱移行細胞乳頭瘤細胞
RTE大鼠氣管上皮細胞
RWPE-2人前列腺正常細胞
SC-1小鼠胚胎細胞
SF126人腦瘤細胞
SF17人腦瘤細胞
SF763人腦瘤細胞
SF767人腦瘤細胞
SK-CO-1人結直腸腺癌細胞
SK-MEL-1人皮膚黑色素瘤細胞
SK-N-BE(2)人神經母細胞瘤細胞
SK-NEP-1人腎母細胞瘤細胞
SK-N-MC人神經上皮瘤細胞
SNU-5人胃癌細胞
Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細胞
SUP-B15人Ph+急淋白血病細胞系
SW 1353人軟骨肉瘤細胞
SW 1990人胰腺癌細胞
SW 780人膀胱移行細胞癌
SW 982人滑膜肉瘤細胞
SW-13人腎上腺皮質癌細胞
T/G HA-VSMC人血管平滑肌細胞
TE-10人食管癌細胞
TE-11人食管癌細胞
L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)小鼠淋巴瘤細胞
TM4正常小鼠睪丸Sertoli細胞
TT人甲狀腺導管癌細胞
U-118 MG人腦星形膠質母細胞瘤
U14小鼠子宮頸癌細胞
U14-GFPGFP標記的小鼠子宮頸癌細胞
UACC-812人乳腺導管瘤細胞
UMR-106大鼠骨肉瘤細胞
UM-UC-3人膀胱移行細胞癌
USMC大鼠血管平滑肌細胞
WERI-Rb-1人視網膜神經膠質瘤細胞
WI38/VA13SV-40Z轉化肺成纖維細胞
WPMY-1人正常前列腺基質永生化細胞
Pt K1 (NBL-3)袋鼠腎細胞
293T/17人胚腎細胞
SV40 MES 13小鼠腎小球系膜細胞
AE-1小鼠雜交瘤細胞(抗AChE)
AE-2小鼠雜交瘤細胞(抗AChE)
Super Tube狗腎細胞
SNU-1人胃癌細胞
A-204 [A204]人橫紋肌肉瘤細胞
B95-8EB病毒轉化的絨猴淋巴細胞
BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纖維細胞
CCC-SMC-1兔主動脈平滑肌細胞
MA-104羅猴胎腎細胞
PC-12(低分化)大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化)
PC-12(高分化)大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)
PED豬內皮細胞
RAMOS人B淋巴細胞瘤細胞
Reh人急性淋巴細胞白血病(非B非T)
SW837人結直腸腺癌上皮細胞
TE671 subline No.2人橫紋肌肉瘤細胞
P69人前列腺上皮細胞

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