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胎牛血清注意事項
如果不能短期內使用完畢,解凍后請適當分裝。血清結冰時體積會增加約10%,因此在分裝血清時須使分裝瓶預留一定體積空間,否則易導致分裝瓶凍裂而發生污染。
熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已*解凍的血清。加熱過程中需有規則地搖晃均勻。熱處理的目的是滅活血清中的補體(complement)。除非必須,一般不推薦對血清進行熱處理。因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量。補體參與的反應有:細胞毒作用、平滑肌細胞收縮、肥大細胞和血小板釋放組胺、增強吞噬作用、促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化等。
瓶裝血清解凍需采用緩慢解凍法:把在-15 ~ -40℃低溫冰箱中保存的血清放入4℃冰箱中解凍約1天,待全部解凍后再分裝。在解凍過程中每隔約2小時可輕輕搖晃均勻(盡量避免產生氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發生。切勿直接將血清從-20℃或更低 溫度進入37℃水浴解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀,從而使用血清的質量下降。
血清中的絮狀沉淀物主要是解凍后血清中纖維蛋白及4℃長時間保存后血清中的脂蛋白變性造成的,這些絮狀物不會影響血清本身的質量,可不用處理。如果必須要處理,可400g離心5分鐘去除。但不宜過濾去除,因為絮狀物可能阻塞濾膜。
經過熱處理的血清中沉淀物會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察像“小黑點",而且由于這些“小黑點"的布朗運動在顯微鏡下被放大,感覺是在游動,所以經常被誤認為血清被微生物污染。通常這些小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清存在微生物污染,則應立即停止使用,更換另一批次的血清。可將適量血清用培養液稀釋至10%濃度后培養1-3天,觀察小黑點是否急劇增多,或取適量血清在LB平板上涂板培養觀察是否產生菌落,以確定是否存在微生物污染。
請勿將血清在37℃放置過長時間,否則血清會逐漸變渾濁,同時血清中的有效成分也會逐漸失活而影響血清質量。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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