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問:看說明書里,如果樣本濃度高,可以不用稀釋,直接加原液。這個直接加血清原液,你們自己親自做過嗎?因為之前我們用別家的,他們說明書里,加樣是:10微升樣品加40微升樣品稀釋液。咨詢他們如果如果濃度高,可以加原液嗎?他們說可以,可能他們沒做過,說可以。可我們做了,不可以。問他們,又說是可能離子濃度不夠。
答:ELISA試劑盒檢測范圍是固定的,樣本是否稀釋是根據樣本實際濃度來選擇的,但前提條件樣本要落在檢測范圍內,濃度高于檢測范圍,稀釋樣本達到檢測范圍內,濃度低于檢測范圍,那這個試劑盒靈敏度是不夠的。離子濃度跟樣本濃度沒有關聯不是影響ELISA試劑盒檢測的關鍵。
問:雙抗夾心法中,最后TMB用硫酸終止,測量OD450的時候是用單波長450nm還是雙波長測量?如果是后者,參考波長是哪個?630nm可以嗎?
答:如果有條件的話,就用雙波長450nm,630nm。如果沒有,單波長也可以。
問:牛免疫球蛋白G(IgG)試劑盒(ELISA)樣本PH值對這個指標影響大嗎?
答:有,要保持中性。不要太偏酸和太偏堿。規定最佳PH=7.2-7.4,可耐受PH5.0-9.0,此外PH值都不適用。
問:樣本PH值偏小,用氫氧化鈉調PH值合適嗎?
答:合適,而且必須調!我們之前做的靜脈注射免疫球蛋白PH=4,都是要調PH到中性。然后再測定。
問:
小鼠白細胞介素-12(IL-12 P35)ELISA Kit
小鼠白細胞介素-12(IL-12 P40)ELISA Kit
小鼠白細胞介素-12(IL-12 P70)ELISA Kit
三個指標有什么區別和聯系?
答:完整的IL-12由兩條鏈通過二硫鍵相連,稱為P70,而這兩條鏈分別稱為P35和P40。
IL-12是一由p35和p40(IL-12β)兩條鏈組成的異源二聚體,兩個亞單位通過二硫鍵連接在一起,這種結構在已發現的IL中所罕見。通常情況下,p40的量遠超出p70,在鼠中已觀察到p40同源二聚體的產生,是由轉染的細胞分泌的,p40同源二聚體沒有生物學活性,但它能和IL-12Rβ結合,與p70競爭性爭奪IL-12受體(IL-12R)而拮抗其生物學作用。單獨的p35不具有生物學活性,但卻是合成p70的限速因子。
天然IL-12(p70 )具有*的異源二聚體結構,是由p40 和 p35兩個亞基通過二硫鍵共價連接而成的糖基化肽鏈〔相對分子質量為(70~75)×103〕.IL-12 p35和p40基因定位于不同的染色體,各自受不同的啟動子和增強子調節,按需生成有活性的p70或拮抗性p(40)2及單體p40.活性形式的IL-12 p70需要兩條亞基共同表達,并以1∶1形式進行自然組合.對已報道的IL-12基因載體來說,存在p40和p35不匹配的組合形式〔5-7〕.構建rhscIL-12融合基因,可使其在一個啟動子的控制之下,翻譯表達活性蛋白,保證p40和p35以1∶1比例形成單鏈異二聚體。
白介素-12是p70,p40是其中的一個亞基。
問:單核巨噬細胞的趨化因子有哪些?
答:CCL2、CCL3、CCL5、CCL7、CCL8、CCL13、CCL17和CCL22
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