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當(dāng)前位置:蘇州千舍生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>HCT-8/FU 人結(jié)腸癌氟尿嘧啶耐藥株培養(yǎng)說明書
細(xì)胞系特征 | ||
編號:WS-HCT001 細(xì)胞株名稱:HCT-8/FU 人結(jié)腸癌氟尿嘧啶耐藥株 種屬:人 組織來源:結(jié)腸癌 生長特性:貼壁生長 形態(tài)特征:上皮細(xì)胞 微生物及支原體檢測:陰性 安全性:所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。 | ||
培養(yǎng)條件:
| wan全培養(yǎng)基:90%RPMI-1640+10%胎牛血清+10000ng/ml 氟尿嘧啶 血清我們推薦用: GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。 培養(yǎng)條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5% | |
傳代方法:
| 收到細(xì)胞后,在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細(xì)胞生長情況。 (一)如果細(xì)胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。 (二)如果細(xì)胞已長滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下: 1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。 2. 加0.7-1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,用力拍打瓶壁,期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察,直至50-70%的細(xì)胞脫落后,加入2ml 以上wan全培養(yǎng)基中止消化。 3. 按6-8ml/瓶補加wan全培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明,收到細(xì)胞后的第一次傳代一般是一傳二。 注:1、觀察細(xì)胞最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請在10X或20X物鏡下。 2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。 3、有些細(xì)胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。 4、收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請及時與我們聯(lián)系。..
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凍存方法: | 凍存液:90%胎牛血清,10%DMSO 儲存:液氮儲存 |
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