產(chǎn)品名稱:人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞SK-N-MC(通過STR)
貨號(hào):QS-H187
細(xì)胞規(guī)格:1-3×10^6細(xì)胞量
庫存狀態(tài):現(xiàn)貨
培養(yǎng)條件:DMEM(L)+10% FBS
運(yùn)輸方式:常溫順豐運(yùn)輸和干冰順豐運(yùn)輸
貨 期:復(fù)蘇細(xì)胞需要1-2周,凍存細(xì)胞的需要2-3天(特殊情況會(huì)有說明)
質(zhì) 控:無支原體、無污染、符合標(biāo)準(zhǔn)
研究范圍:僅供科研使用
人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞SK-N-MC(通過STR)
我司主要經(jīng)營產(chǎn)品是國內(nèi)傳代細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的生物試劑。GIBCO、HyClone、NTC、SIGMA、 BI 、GEMINI、PAN和SBI無外泌體血清等高品質(zhì)血清。常規(guī)液體培養(yǎng)基、胰酶、雙抗、無血清凍存液、日本三菱產(chǎn)品、ELISA 試劑盒等產(chǎn)品。售后完善,我們以飽滿的熱情歡迎新老客戶選購!
我司以客戶為核心,以產(chǎn)品質(zhì)量求生存,以售后服務(wù)求信譽(yù)。我們通過不斷改進(jìn)來提高效率,絕不以犧牲品質(zhì)作為代價(jià)。“誠信、創(chuàng)新、嚴(yán)謹(jǐn)、專業(yè)”愿以飽滿的熱情期待各界朋友攜手合作,共創(chuàng)輝煌!
一、客戶收到細(xì)胞后需注意事項(xiàng):
1、收到細(xì)胞,請(qǐng)查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請(qǐng)盡快聯(lián)系。
2、收到細(xì)胞,如包裝完好,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。由于運(yùn)輸途中的影響,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí),請(qǐng)不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右,讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,再于顯微鏡下觀察,此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁,請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理。
3、收到細(xì)胞后,請(qǐng)顯微鏡下觀察細(xì)胞,用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)離心收集細(xì)胞,接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的*培養(yǎng)液,使用進(jìn)口胎牛血清。剛接到細(xì)胞,若細(xì)胞不多時(shí)血清濃度可以提高5%去培養(yǎng)。若細(xì)胞達(dá)到80%左右,血清濃度按照說明書要求進(jìn)行調(diào)配。
4、收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,留下 5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng),懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
5、將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時(shí)之需。
6、24小時(shí)后,細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,即可傳代。(貼壁細(xì)胞)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn))PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化,消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn),一般1-3分鐘,不超過5分鐘。可以放入37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁,見細(xì)胞脫落下來,加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,1000rpm/5min。棄上清,視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),一般一傳二,如細(xì)胞量多可一傳三,有些細(xì)胞不易傳得過稀,有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶,以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。(懸浮細(xì)胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
7、貼壁細(xì)胞,懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無菌操作。換液時(shí),換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
血清是一種*培養(yǎng)基,含有細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需的多種營養(yǎng)成分,如蛋白質(zhì)、多肽等,多用于細(xì)胞培養(yǎng)、生物制品及診斷試劑的生產(chǎn)。
血清的主要成分是蛋白質(zhì),血清的組成成分與含量常常與供血?jiǎng)游镄詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件有關(guān)。
那么如何挑選合適的血清?使用血清時(shí),需要注意哪些問題?現(xiàn)在我們一起來看看。
二、胎牛血清和新生牛血清
1.取血年齡不同:牛血清按照牛取血時(shí)間或牛齡可進(jìn)行區(qū)分。胎牛血清(Foetal Bovine Serum,簡(jiǎn)稱FBS)指的是取自未出生,母牛剖腹得來的胎牛。
國產(chǎn)胎牛血清(并無明確定義,但通常以此稱)的指的是出生4-6小時(shí),且未進(jìn)行哺乳進(jìn)食的牛,有時(shí)還稱作國產(chǎn)新生牛。
新生牛血清指的是出生14天-3個(gè)月進(jìn)行取血的牛,成年牛血清指的是取血時(shí)牛齡通常超過12個(gè)月的牛。
以上取血牛齡的差異主要是受當(dāng)?shù)貒倚竽翗I(yè)的發(fā)展及法規(guī)限制影響,因?yàn)榕Q酁樾竽翗I(yè)副產(chǎn)業(yè),并未有專門為取血而養(yǎng)的牛。
組分與比例不同:這幾種不同牛齡血清所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組分與比例不同。常規(guī)來說,年齡越小的牛血清,細(xì)胞培養(yǎng)效果越好。胎牛血清培養(yǎng)效果好于新生牛,且因?yàn)樘ヅN催M(jìn)食過母乳,所以IgG含量低。
用途與用法不同:根據(jù)細(xì)胞所需生長(zhǎng)條件可確定。
2.如何挑選適合細(xì)胞生長(zhǎng)的血清?
原代或是正常細(xì)胞株建議使用優(yōu)等或特級(jí)胎牛血清,對(duì)生長(zhǎng)條件要求高的細(xì)胞和干細(xì)胞可選用特級(jí)胎牛血清,或胚胎干細(xì)胞胎牛血清。
由于血清有批間差異,細(xì)胞種類不同,我們建議客戶購買前可先申請(qǐng)?jiān)囉脴悠罚ㄟ^篩選得到滿意的血清批號(hào),之后根據(jù)項(xiàng)目需求可進(jìn)行批量囤貨,以保證該項(xiàng)目所需血清質(zhì)量的一致性,可排除不同批號(hào)血清對(duì)于實(shí)驗(yàn)帶來的影響。
3.如何正確保存血清?
需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃冰箱(未開封血清有效期為5年)。若存放于4℃,請(qǐng)勿超過1個(gè)月,若一次無法用完一瓶,建議將血清無菌分裝并冷凍。
4.如何解凍血清?
血清解凍需采用逐步解凍法:將血清從-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解一天,然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),減少沉淀生成。切勿直接將血清從-20℃轉(zhuǎn)入37℃解凍,這樣因溫差較大易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)并出現(xiàn)沉淀。
5.需要對(duì)新買的血清進(jìn)行過濾嗎?
血清在ISO13485認(rèn)證的廠房中生產(chǎn),經(jīng)過3次0.1μm過濾,出廠經(jīng)過檢測(cè)并且會(huì)使用三種以上的細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)測(cè)試及無菌檢測(cè),污染幾率非常低。通常細(xì)胞污染有非常多的可能性,根據(jù)協(xié)助使用者進(jìn)行分析檢測(cè),結(jié)果表明絕大部分都是因人為操作失誤導(dǎo)致污染。因此買來的血清不需要再次進(jìn)行過濾。
6.除了對(duì)血清進(jìn)行檢測(cè),有何更直觀的方式分辨血清質(zhì)量?
目測(cè)法,我們可根據(jù)血清的顏色,沉淀,澄清度等進(jìn)行區(qū)分。
顏色:顏色根據(jù)血清蛋白含量的不同,可表現(xiàn)出黃色或者紅色。進(jìn)口血清質(zhì)量較好的呈現(xiàn)出淡黃、微紅色,較差質(zhì)量呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。熱滅活血清或保存不當(dāng)?shù)模捎谘t蛋白的破壞氧化,會(huì)呈現(xiàn)出暗紅色,甚至咖啡色。
沉淀:血清中的沉淀主要是有纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生。沉淀產(chǎn)生的原因很多,使用時(shí)反復(fù)凍融會(huì)增加沉淀。進(jìn)口血清過濾分裝前很少反復(fù)凍融,因此成品清澈。
澄清度:進(jìn)口血清是由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡。國產(chǎn)血清絕大多數(shù)為新生牛血清,相對(duì)而言更加粘稠,顏色略深。
7.為何血清會(huì)存在批間差?如何避免此影響?
因?yàn)檠鍋碓从趧?dòng)物,其組成成分有1000種左右,每個(gè)批號(hào)的組分和組分含量都是不固定的,因此批間差異是可能存在的。
為了避免批間差異對(duì)細(xì)胞的影響,建議先進(jìn)行批號(hào)測(cè)試,篩選合適的批號(hào),備好庫存(血清未開封時(shí),在-20℃下可保存5年)。如需更換血清批次或產(chǎn)地,建議先試用后再大量訂購。
8.血清中沉淀是什么成分?造成原因有哪些?如何預(yù)防和處理沉淀?
血清中沉淀主要有:纖維蛋白(絮狀沉淀),甲胎蛋白,脂蛋白,冷凝集素,玻粘連蛋白,磷酸鈣[1](顯微鏡下小黑點(diǎn)沉淀),膽固醇等。
原因:造成沉淀的主要原因是溫度的改變。熱滅活,反復(fù)凍融,長(zhǎng)期儲(chǔ)存于2-8℃或者室溫。
預(yù)防措施與建議:因此不立即使用的血清應(yīng)保存在-20℃或以下。
9.血清為何要熱滅活,有必要對(duì)所有血清都滅活嗎?如何正確的進(jìn)行滅活?
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。啟動(dòng)的補(bǔ)體系統(tǒng)參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,啟動(dòng)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化。在免疫學(xué)研究中,培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。
實(shí)驗(yàn)顯示,熱滅活血清對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,對(duì)于非必須的細(xì)胞來說血清滅活對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)只有微小甚至無任何作用,還可能造成生長(zhǎng)速率降低,沉淀物還會(huì)顯著增多,不利于細(xì)胞觀察。因此,若非必須,不需要對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。
將需要進(jìn)行處理的血清置于56℃水浴30min,建議加放空白對(duì)照(同體積水)使用溫度計(jì)測(cè)溫,以測(cè)得溫度為56℃時(shí)為計(jì)時(shí)起始點(diǎn),加熱中可不時(shí)輕度旋轉(zhuǎn)混勻血清。
Hyclone胎牛血清FBS SH30084.03 AUSTRALIA 500ML
Hyclone優(yōu)等胎牛血清FBS SH30406.05 New Zealand 500ML
Hyclone特級(jí)胎牛血清FBS SH30396.03 Canada 500ML
Hyclone特級(jí)胎牛血清FBS SH30070.03 USA 500ML
Hyclone活性炭/葡聚糖處理 SH30068.03 USA 500ML
Hyclone馬血清 SH30074.03 USA 500ML
Hyclone烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03 Uruguay 500ML
Hyclone標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清 SH30071.03 USA 500ML
Hyclone優(yōu)等胎牛血清 SV30160.03 SOUTH AMERICA 500ML
Hyclone新生牛血清 SH30413.02 New Zealand 500ML
SERANA胎牛血清FBS S-FBS-SA-015 SOUTH AMERICA 500ML
SERANA胎牛血清FBS S-FBS-EU-015 SOUTH AMERICA 500ML
SERANA胎牛血清FBS S-FBS-US-015 USA 500ML
SERANA胎牛血清FBS S-FBS-AU-015 AUSTRALIA 500ML
SERANA超低IgG胎牛血清 S-FBS-SA-055 SOUTH AMERICA 500ML
SERANA透析胎牛血清Dialyzed FBS S-FBS-US-065 USA 500ML
SERANA活性炭/葡聚糖處理 S-FBS-AU-045 AUSTRALIA 500ML
BOVOGEN胎牛血清FBS SFBS SOUTH AMERICA 500ML
BOVOGEN胎牛血清FBS SFBS New Zealand 500ML
BOVOGEN胎牛血清FBS SFBS AUSTRALIA 500ML
BOVOGEN新生牛血清 New Zealand 500ML
PAA 普通胎牛血清FBS A15-101 EU 500ML
PAA 優(yōu)等胎牛血清FBS A15-151 EU 500ML
BI優(yōu)等胎牛血清 04-001-1ACS SOUTH AMERICA 500ML
BI ES級(jí)別胎牛血清 04-002-1A SOUTH AMERICA 500ML
BI 間充質(zhì)干細(xì)胞胎牛血清 04-400-1A SOUTH AMERICA 500ML
Corning康寧優(yōu)等胎牛血清 35-076-CV AUSTRALIA 500ML
PAN胎牛血清FBS P30-3302 SOUTH AMERICA 500ML
PAN胎牛血清FBS ST30-3302 SOUTH AMERICA 500ML
PAN ES級(jí)別胎牛血清 ST30-2602 SOUTH AMERICA 500ML
PAN胎牛血清FBS Plus ST30-3302P SOUTH AMERICA 500ML
NTC優(yōu)等胎牛血清 SFBE 阿根廷 500ML
Gemini優(yōu)等胎牛血清 900-108 SOUTH AMERICA 500ML
Gemini特級(jí)胎牛血清 100-500 USA 500ML
Gemini科研用人AB血清 100-512 USA 100ML
TCB胎牛血清 101ZC New Zealand 500ML
Sigma 特級(jí)胎牛血清 F2442 USA 500ML
Sigma正常人AB血清 H4522 USA 100ML
SBI 無外泌體血清 EXO-FBS-50A-1 USA 50ML
GIBCO 雙抗 15140-122 100ml
GIBCO 胰酶 25200-056 100ml
GIBCO 胰酶 25200-072 500ml
DMEM高糖培養(yǎng)基 C11995500BT 500ml
DMEM低糖培養(yǎng)基 C11885500BT 500ml
PBS C10010500BT 500ml
1640培養(yǎng)基 C11875500BT 500ml
DMEM/F12 C11330500BT 500ml
MEM C11095500BT 500ml
α-MEM C12571500BT 500ml
HyClone 雙抗 SV30010 100ml
HyClone 胰酶 SH30042.01 100ml
DMEM低糖 SH30021.01 500ml
DMEM高糖(不含丙酮酸鈉) SH30022.01 500ml
DMEM/F-12 1:1 SH30023.01 500ml
MEM/EBSS SH30024.01 500ml
IMDM SH30228.01 500ml
DMEM高糖(含丙酮酸鈉) SH30243.01 500ml
M199/EBSS SH30253.01 500ml
PBS緩沖液 SH30256.01 500ml
α-MEM SH30265.01 500ml
改良型RPMI-1640 SH30809.01 500ml
DPBS SH30028.02 500ml