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盒裝胎牛血清|免分裝

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盒裝胎牛血清|免分裝

產品名稱:盒裝免分裝~

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規格:50ml*10

品牌:winsera ....
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盒裝胎牛血清|免分裝

產品名稱:盒裝免分裝~

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規格:50ml*10

品牌:winsera \....

§細胞抱團怎么處理?

一些懸浮細胞抱團生長是正常現象,大部分懸浮細胞在細胞密度很高的情況下,很可能會出現部分細胞抱團生長的現象,聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物,殃及周圍的懸浮細胞,因此在培養懸浮細胞時需控制好細胞密度。如果出現了細胞團,可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團,也可以嘗試一下方法:將細胞懸液收集到15 ml離心管中,靜置20 min左右,小心取上層細胞上清培養(該方法只能去除部分較大的細胞團)。

§細胞內有空泡,是否是正常現象?

部分細胞本身存在一定的空泡(如HepG2,Ishikawa及一些耐藥株等),這個是正常現象。如果只有少數細胞有內出現極少空泡,則很可能是細胞狀態不佳,可以通過調整血清濃度,控制消化,控制傳代比例及時間等方法來調整細胞狀態;如果大部分細胞出現空泡,且單個細胞內空泡數目偏多,則可能細胞代次較高,細胞老化所致,需更換代次較早的細胞。

§細胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因

很可能是培養體系不適合細胞(未使用推薦的培養體系);或者消化過度,對細胞有嚴重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細胞,傳代太稀;或者生長較快的細胞,傳代較密,細胞嚴重堆疊生長)。

§細胞生長逐漸變慢是什么原因?

細胞增殖變慢有以下原因:1. 消化過度 2. 傳代過密 3.細胞營養不良 4.細胞頻繁傳代 5.細胞狀態不佳或老化 6.細胞存在污染。

§培養細胞時應使用5%或10%CO2?

一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統,而培養基中NaHCO3的含量將決定細胞培養時應使用的CO2濃度。當培養基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時,細胞培養時應使用10% CO2;當培養基中NaHCO3為每公升1.5 g時,則應使用5% CO2培養細胞。

§CO2培養箱之水盤如何保持清潔?

定期(每周一次)更換水盤里面的水,水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子,水盤中可添加1%硫酸銅以預防霉菌污染。

§細胞接種密度多少合適?

依照細胞株基本數據上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長的一個重要原因。按照我們的經驗:一般倍增時間24 h內的細胞,傳代比率1:6-1:12為宜,倍增時間24-48 h的細胞,傳代比率1:3-1:8為宜,倍增時間超過48h的細胞, 傳代比率1:2-1:4為宜。因此選擇正確的,靠譜的胎牛血清及廠家極其重要↓↓↓↓

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DECO0165 人可替丁(Cotinine )ELISA試劑盒

DECO0166 人凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒20.如果細胞發生微生物污染時,應如何處理?

原則上:直接滅菌后丟棄之。

當重要的培養污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如霉素b和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟。

1.在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞,稀釋到常規細胞傳代的濃度。

2.分散細胞懸液到多孔培養板中,或幾個小培養瓶中。在一個濃度梯度范圍內,把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,霉素b推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。

3.每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現空泡,匯合度下降和變圓。

4.確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2~3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2~3代。

5.在無抗生素的培養基中培養細胞一代。

6.重復步驟4。

7.在無抗生素的培養基中培養4~6代,確定污染是否以已被消除。

21.支原體(mycoplasma) 污染的細胞,是否能以肉眼觀察出異狀?

不能。除極有經驗之專家外,大多數遭受支原體污染的細胞株,無法以其外觀分辨之。

22.支原體污染會對細胞培養有何影響?

支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數, 代謝及研究之任一數據。故進行實驗前,必須確認細胞為mycoplasma-free,實驗結果之數據方有意義。

23. 偵測出細胞株有支原體污染時, 該如何處理?

直接滅菌后丟棄,以避免污染其它細胞株。

24. CO2 培養箱之水盤如何保持清潔?

定期(至少每兩周一次) 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。

25.為何培養基保存于4 °C 冰箱中, 顏色會偏暗紅色, 且pH值會越來越偏堿性?

培養基保存于4 °C 冰箱中, 培養基內之CO2 會逐漸溢出,造成培養基越來越偏堿性。而培養基中之酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿之結果,將造成細胞生長停滯或死亡。若培養基偏堿時,可以通入無菌過濾之CO2, 以調整pH 值。

26. 各種細胞培養用的dish,flask是否均相同?

不同廠牌的dish 或flask, 其所coating 的polymer 不同, 制造程序亦不同, 雖對大部分細胞沒有太大之影響,惟少數細胞則可能因使用廠牌不同之dish 或flask 而有顯著之生長差異。

27. 購買之細胞冷凍管經解凍后,為何會發生細胞數目太少之情形?

研究人員在冷凍細胞之培養時出現細胞數目太少, 大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷, 以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心, 應待細胞生長隔夜后再更換培養基即可。

28.購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?

研究人員在細胞培養時出現存活率不佳, 常見原因可歸納為:培養基使用錯誤或培養基品質不佳。血清使用錯誤或血清的品質不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養溫度使用錯誤。細胞置于–80 °C 太久。

29. 收到之冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?

冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應立刻將冷凍管再一次扭緊。

30.L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎?它在溶液中不穩定嗎?

L-谷氨酰胺在細胞培養時是重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間后會降解,但是確切的降解率一直沒有最終定論。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。

31.GlutaMAX-I是什么?培養細胞如何利用GlutaMAX-I?這個二肽有多穩定?

GlutaMAX-I 二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物,其不穩定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。
GlutaMAX-I二肽非常穩定,即使在121磅滅菌20分鐘,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎*降解。

32.什么培養基中可以省去加酚紅?

酚紅在培養基中用作PH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用,(特別是雌激素)。為避免固醇類反應,培養細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養基。

33.如何用臺盼蘭計數活細胞?

用無血清培養基把細胞懸液稀釋到200~2000個/毫升,在0.1毫升細胞懸液中加0.1毫升0.4%的臺盼蘭溶液。輕輕混勻,數分鐘后,用血球計數板計數細胞。活細胞排斥臺盼蘭,因而染成藍色細胞是死細胞。

34.培養基中丙酮酸鈉的作用是什么?

丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源,盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是,如果沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。

35.二價離子抑制蛋白酶活性嗎?使用蛋白酶時加入EDTA的目的是什么?

二價離子的確抑制蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制蛋白酶的活性。建議蛋白酶處理細胞前,用EDTA清洗細胞,以消除來自培養基中所有的二價離子。

36.室溫下配制的Tris-HCl溶液,在37℃使用時PH值是多少?

緩沖液PH值隨溫度變化而變化。下表列出了50mM Tris-HC 溶液在4℃,25℃,37℃時,不同PH值。

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