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EBV 轉化的絨猴白細胞B95-8

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所在地蘇州市

更新時間:2023-12-22 08:56:13瀏覽次數:1515次

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供貨周期 現貨 應用領域 醫療衛生,生物產業
EBV 轉化的絨猴白細胞B95-8
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EBV 轉化的絨猴白細胞B95-8

1640+10%FBS+1%P/S  

懸浮生長

細胞死亡及生長異常

 

1、首先講一下細胞生長緩慢的原因:

 

a)更換了血清或者培養基,細胞需要一段時間適應一下;

 

b)由于細胞的特殊種類,培養基中缺少某些生長因子;

 

c)培養基中有少量真菌或者細菌污染;

 

d)傳代的時候細胞密度過低;

 

e)細胞狀態老化;

 

f)支原體污染。

 

2、解決上述問題的方法:

 

a)如果實驗室沒有某種細胞最適宜的培養基,可以先用原培養條件凍存一些,然后逐漸增加新的培養基比例,25%50%75%100%,傳代3-5次后,讓細胞慢慢適應。

 

b)判斷是不是培養基發生污染,可以先不加抗生素,觀察細胞狀態。

 

c)增加細胞的接種密度。

 

d)發現細胞老化的時候,及時更換新的細胞。

 

e)如果懷疑是支原體污染,一定要隔離疑似污染的培養皿,及時清潔消毒孵箱。

 

3、造成細胞死亡的原因:

 

a)細胞消化過度;

 

b)沒有及時換液,營養成分消耗殆盡;

 

c)如果前一天細胞的狀態很好,換液之后就全死了,應該考慮是否是培養基或者血清的問題。

 

4、如何判定細胞是否發生支原體污染:可以選用直接培養法、熒光染色或PCR方法檢測,比較常用的是PCR。當細胞發生支原體污染時,原則上是能夠去除支原體的,但是整個過程耗時耗力,還要考驗個人操作能力。所以如果不是處于細胞存量很少的情況下,建議發現污染時立刻棄掉,重新培養。

 

5、如果孵箱中只是某種細胞持續性大量死亡,而其他細胞狀態都沒問題的話,基本上可以確定就是孵箱存在特異性感染這類細胞的真菌或細菌,遇到這種情況,小六兒也不知道該怎么做,只能是先停一段時間看看。。。。。。

 

5、其他注意事項:每個星期都要更換孵箱底盤中的水(紫外照射后超純水);每兩周消毒一次孵箱:75%酒精擦拭一遍后,再用0.1%新潔爾滅擦拭一遍(都用超純水配制);可以在孵箱底部放一個燒杯,里面放入飽和硫酸銅,可以抑制霉菌生長。不過也有人說硫酸銅會改變孵箱的PH值,如果不是孵箱污染的情況很嚴重,建議不要使用

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EBV 轉化的絨猴白細胞B95-8

細胞復蘇

細胞復蘇和凍存講究“慢凍快溶",復蘇時一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細胞凍存液快速融化至37℃,使胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。

 

復蘇準備

 

?打開水浴鍋加熱至37℃。

 

? 超凈臺上放好離心管(一般15ml的),細胞培養瓶,移液管,紫外滅菌至少2030分鐘,吹風510分鐘除去臭氧。

 

?37℃預熱好要復蘇細胞的培養液,也可以不用預熱培養液,根據細胞情況選擇。

 

?向離心管中加約510ml培養液,從液氮罐或-80℃中取出凍存細胞,立即將凍存管放入37℃水浴中并輕輕搖動,待融化后(約2min即可)立即將解凍的細胞轉移至含培養液的離心管中,800-1000rpm下離心5min,棄上清,加適量*培養液輕輕吹打重懸細胞后轉移至細胞培養瓶中,輕晃使瓶底液體分散均勻,標好細胞名稱、代數、復蘇日期,顯微鏡下觀察后放入37℃,5%CO2培養箱中。一般貼壁細胞過夜即可貼壁,換液和傳代時間根據不同細胞生長情況而定。

 

細胞復蘇注意事項

 

?復蘇時動作要快,盡量減少胞內形成冰晶,影響復蘇后細胞活率。

 

? 融化時盡量不要碰到管口,以免容易造成污染。

 

?若一次性需要復蘇細胞很多,可以分批水浴解凍,防止傳熱不佳使得細胞融化時間延長。

 

?若需要同時復蘇好幾種細胞,提前在離心管和培養瓶上做好標記,或記住自己擺放的位置,不要弄混亂。


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