非洲綠猴腎細胞 SV40轉化 COS-7
DMEM+10%FBS+1%P/S
貼壁生長
細胞死亡及生長異常
1、首先講一下細胞生長緩慢的原因:
a)更換了血清或者培養基,細胞需要一段時間適應一下;
b)由于細胞的特殊種類,培養基中缺少某些生長因子;
c)培養基中有少量真菌或者細菌污染;
d)傳代的時候細胞密度過低;
e)細胞狀態老化;
f)支原體污染。
2、解決上述問題的方法:
a)如果實驗室沒有某種細胞最適宜的培養基,可以先用原培養條件凍存一些,然后逐漸增加新的培養基比例,25%、50%、75%到100%,傳代3-5次后,讓細胞慢慢適應。
b)判斷是不是培養基發生污染,可以先不加抗生素,觀察細胞狀態。
c)增加細胞的接種密度。
d)發現細胞老化的時候,及時更換新的細胞。
e)如果懷疑是支原體污染,一定要隔離疑似污染的培養皿,及時清潔消毒孵箱。
3、造成細胞死亡的原因:
a)細胞消化過度;
b)沒有及時換液,營養成分消耗殆盡;
c)如果前一天細胞的狀態很好,換液之后就全死了,應該考慮是否是培養基或者血清的問題。
4、如何判定細胞是否發生支原體污染:可以選用直接培養法、熒光染色或PCR方法檢測,比較常用的是PCR。當細胞發生支原體污染時,原則上是能夠去除支原體的,但是整個過程耗時耗力,還要考驗個人操作能力。所以如果不是處于細胞存量很少的情況下,建議發現污染時立刻棄掉,重新培養。
5、如果孵箱中只是某種細胞持續性大量死亡,而其他細胞狀態都沒問題的話,基本上可以確定就是孵箱存在特異性感染這類細胞的真菌或細菌,遇到這種情況,小六兒也不知道該怎么做,只能是先停一段時間看看。。。。。。
5、其他注意事項:每個星期都要更換孵箱底盤中的水(紫外照射后超純水);每兩周消毒一次孵箱:75%酒精擦拭一遍后,再用0.1%新潔爾滅擦拭一遍(都用超純水配制);可以在孵箱底部放一個燒杯,里面放入飽和硫酸銅,可以抑制霉菌生長。不過也有人說硫酸銅會改變孵箱的PH值,如果不是孵箱污染的情況很嚴重,建議不要使用。
人膽囊上皮細胞永生化
人膽囊上皮細胞永生化+GFP
人前庭鞘膜瘤細胞永生化
人胰腺神經內分泌腫瘤細胞永生化
人胰腺癌細胞永生化
人胰腺癌相關成纖維細胞永生化
人風濕性關節滑膜成纖維細胞永生化
人主動脈內皮細胞永生化
人子宮內膜上皮細胞永生化
人肝竇內皮細胞永生化
人腸癌細胞永生化
人頸靜脈球瘤細胞永生化
人副神經節瘤細胞永生化
人腸息肉上皮細胞永生化
人原代聽神經瘤細胞永生化
人原代髓核細胞永生化
人原代神經鞘膜瘤細胞永生化
人胰腺腫瘤成纖維細胞永生化
人眼瞼皮脂腺癌細胞永生化
人主動脈瓣膜間質細胞永生化
人睪丸支持細胞永生化
人骨骼肌細胞永生化
人卵巢癌細胞永生化
人真皮成纖維細胞永生化
人原代甲狀旁腺主細胞永生化
人原代乳腺上皮細胞永生化
人原代乳腺癌成纖維細胞永生化
人原代軟骨細胞永生化
人臍靜脈內皮原代細胞+GFP 原代細胞+GFP
人神經母細胞瘤細胞 sh-sy5y轉染突變型
人神經母細胞瘤細胞 sh-sy5y轉染野生型
小鼠肺成纖維細胞永生化
小鼠附睪脂肪干細胞永生化
小鼠腎小球系膜細胞永生化
小鼠胰腺星狀細胞永生化
小鼠脂肪干細胞永生化
麝香鼠原代乳腺上皮細胞永生化
小鼠骨髓巨噬細胞永生化
小鼠角膜上皮細胞永生化
非洲綠猴腎細胞 SV40轉化 COS-7
細胞復蘇
細胞復蘇和凍存講究“慢凍快溶",復蘇時一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細胞凍存液快速融化至37℃,使胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。
復蘇準備
?打開水浴鍋加熱至37℃。
? 超凈臺上放好離心管(一般15ml的),細胞培養瓶,移液管,紫外滅菌至少20至30分鐘,吹風5至10分鐘除去臭氧。
?37℃預熱好要復蘇細胞的培養液,也可以不用預熱培養液,根據細胞情況選擇。
?向離心管中加約5至10ml培養液,從液氮罐或-80℃中取出凍存細胞,立即將凍存管放入37℃水浴中并輕輕搖動,待融化后(約2min即可)立即將解凍的細胞轉移至含培養液的離心管中,800-1000rpm下離心5min,棄上清,加適量*培養液輕輕吹打重懸細胞后轉移至細胞培養瓶中,輕晃使瓶底液體分散均勻,標好細胞名稱、代數、復蘇日期,顯微鏡下觀察后放入37℃,5%CO2培養箱中。一般貼壁細胞過夜即可貼壁,換液和傳代時間根據不同細胞生長情況而定。
細胞復蘇注意事項
?復蘇時動作要快,盡量減少胞內形成冰晶,影響復蘇后細胞活率。
? 融化時盡量不要碰到管口,以免容易造成污染。
?若一次性需要復蘇細胞很多,可以分批水浴解凍,防止傳熱不佳使得細胞融化時間延長。
?若需要同時復蘇好幾種細胞,提前在離心管和培養瓶上做好標記,或記住自己擺放的位置,不要弄混亂。