名稱:胃癌類器官培養(yǎng)基
貨號:WS013-100ml/WS013-500ml
規(guī)格:100ml/500ml
品牌:WinSera
一、產(chǎn)品描述:
胃癌類器官基礎培養(yǎng)基可應用于人胃癌來源類器官的常規(guī)培養(yǎng)傳代,能夠保持其傳代后的生長活力,類器官培養(yǎng)過程中,不用添加任何其他蛋白因子。
二、使用方法:
1. 原代
(1)取材后的胃癌組織須在 2-8℃含有組織保存液的取樣瓶中,快速轉(zhuǎn)運至潔凈實驗室進行組織處理和干細胞分離,拍照并登記信息。
(2)準備若干培養(yǎng)皿,加入 4℃預冷的類器官培養(yǎng)緩沖液#abs9543 備用。
(3)取樣瓶消毒,將組織放入培養(yǎng)皿中,利用類器官培養(yǎng)緩沖液#abs9543 清洗三次后,利用眼科剪或手術(shù)dao將腫瘤組織jian切成體積約為 1-3 mm3 的組織塊。
(4)組織用原代組織xiao化液#abs9522 消化,37℃震蕩消化10-20 min,(消化過程中隨時觀察消化情況)。
(5)取少量液體在顯微鏡下觀察,鏡下觀察到較多的單個細胞或 70 um 以下的細胞簇后,加入三倍體積類器官培養(yǎng)緩沖液#abs9543 終止消化。
(6)使用100 um孔徑的篩網(wǎng)進行過濾,將濾液收集后,于300 g富集離心5 min后移去上清,添加類器官培養(yǎng)緩沖液#abs9543 重新重懸離心。
(7)基質(zhì)膠計算:第6步后觀察收集到的組織體積,添加25倍組織體積的基質(zhì)膠重懸鋪板。
(8)24孔細胞培養(yǎng)板為例,每孔點膠25ul組織基質(zhì)膠混合物進行鋪板(4℃下操作)。
(9)將鋪好的培養(yǎng)板放入37℃培養(yǎng)箱中10-15 min成膠,添加培養(yǎng)基(恢復室溫)進行培養(yǎng)。
2. 類器官傳代培養(yǎng)
(1)移液器吸去培養(yǎng)基,每孔添加1-2 ml 4℃類器官緩沖液#abs9543放置2 min。
(2)移液搶輕柔吹打基質(zhì)膠,收集在15 ml離心管中,4℃靜置10 min。(每6-8孔為一組)
(3)① 類器官數(shù)量不足或體積較小時: 離心5 min棄去上清,添加適量類器官緩沖液#abs9543 重懸移入1.5 ml離心管,300 g離心5 min棄去液體進行第4步。
② 類器官數(shù)量較多或體積較大時:離心5 min棄去上清,添加適量類器官傳代消化液#abs9520 消化2-3min,添加類器官緩沖液#abs9543 終止消化,離心5min棄去混合液,添加適量類器官緩沖液#abs9543重懸移入1.5 ml離心管,300 g離心5 min棄去液體進行第4步。
(4)類器官收集后,添加基質(zhì)膠重懸,每孔25 ul基質(zhì)膠鋪在24孔細胞培養(yǎng)板中,放置培養(yǎng)箱中10-15 min添加500 ul培養(yǎng)基。
3. 類器官凍存
(1)移液器吸去培養(yǎng)基,每孔添加1-2 ml 4℃類器官緩沖液#abs9543 放置2 min。
(2)移液搶輕柔吹打基質(zhì)膠,收集在15 ml離心管中,4℃靜置10 min。(每6-8孔為一組)
(3)離心5 min棄去上清,添加適量類器官緩沖液#abs9543 再次重懸,300 g離心5 min棄去液體。
(4)添加適量類器官凍存液#abs9519 ,輕柔吹打重懸,以24孔細胞培養(yǎng)板為例:密度為2個孔凍存1管,每管體積4 ml。
(5)做好標記信息,進行程序降溫后,移入液氮長期保存。
4. 類器官復蘇
(1)取10 ml類器官培養(yǎng)緩沖液#abs9543 于15 ml離心管中。
(2)從液氮罐中取出凍存的類器官細胞,快速置于 37℃水浴鍋中融解。
(3)水浴融解過程中,需輕輕搖動冷凍管,以確保凍存液在 1-2 min內(nèi)全部融解。
(4)將溶解后的類器官細胞快速轉(zhuǎn)移至15 ml 離心管,使用移液管輕輕吹打6-8次,300 g 離心 5 min,然后除去上清液并收集類器官細胞沉淀。添加適量類器官緩沖液#abs9543 重懸移入5 ml離心管300 g離心5 min。
(5)基質(zhì)膠重懸,每孔25 ul基質(zhì)膠鋪在24孔細胞培養(yǎng)板中,放置培養(yǎng)箱中10-15 min成膠,添加500 ul培養(yǎng)基。
三、儲存/保存方法
4°C,保質(zhì)期3個月;-20°C,保質(zhì)期12個月
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溫馨提示:本產(chǎn)品僅作科研實驗使用,不支持臨床等研究