成球能力是腫瘤干細胞體外鑒定的一個重要方法。其判斷的是單個細胞在合適的條件培養基中自我更新的能力，一般用細 胞球形成效率( Sphere Formation Efficiency, SFE)表示。對于某些腫瘤如膠質瘤和乳腺癌，它們的腫瘤干細胞在體外條件培養時相對較容易形成細胞球，而另--些上皮腫瘤如肝癌、結腸癌等則
相對成球困難。
為了促進細胞的成球生長，近些年人們開始使用低粘附的培養板防止細胞貼壁，結合使用無血清培養基(加入B27和合適濃度的生長因子等添加劑，各種腫瘤報道的不盡相同)，以及使用1%濃度的甲基纖維素抑制細胞聚集以確保一個細胞球來源于單個細胞等，建立了一套新的方法，獲得了不錯的效果。目前該方法已經在多種腫瘤干細胞的研究中得到應用。