1.用二甲苯浸洗2次，每次5min;

2.用梯度7醇(100.95.90.80、70%)各浸洗1次，每次3min:注:上面兩步是針對石蠟切片樣木的外理

3.用Proteinase K作液外理組織15 30 min 在21-370(溫度、時間、濃度均需摸索)或者加細胞通透液8min

4.PBS漂洗2次;

5.制備TUNEL反應混合液，處理組用50ulTdT+450ul 熒光素標記的dUTP液混勻;而陰性對照組僅加50ul 熒光素標記的dUTP液，陽性對照組先加入100ul DNase 1，反應在15~25℃x10min，后面步驟同處理組。

6.玻片干后，加50uI TUNEL反應混合液(陰性對照組僅加50u熒光素標記的dUTP液)于標本上，加蓋玻片或封口膜在暗濕盒中反應37℃x1h。

7.PBS漂洗3次;

8. 可以加1滴PBS在熒光顯微鏡下計數凋亡細胞(激發光波長為450~500nm，檢測波長為515~565nm);

9.玻片干后加50ul converter-POD干標本上，加蓋玻片或封口膜在暗濕盒中反應37°cx30min.

10.PBS漂洗3次，

11.在組織處加50~100uIDAB底物，反應15~25℃℃x10min;

12.PBS漂洗3次;

13.拍照后再用蘇木素或電其綠復染，幾秒后立即用自來水沖洗。梯度灑精脫水，二電苯透明，中性樹膠封片。

14.加一滴PBS或甘油在視野下，用光學顯微錯觀察凋廣細胞(共計200~500個細胞)并拍照，可結合調廣細胞形太特征來綜合判斷(未染色細胞變小，胞膜完整但出現發泡現象，晚期出現凋亡小體，貼壁細胞出現鄒縮、變圓、脫落;而染色細胞呈現染色質濃縮、邊緣化，核膜裂解，染色質分割成塊狀/凋亡小體。

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