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游離膽固醇(FC)檢測試劑盒(COD-PAP雙試劑比色法)
產(chǎn)品貨號:BA1836
產(chǎn)品規(guī)格:100T
產(chǎn)品簡介:
膽固醇(Cholesterol)又稱膽甾醇,是一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物,廣泛存在于動物體內(nèi),其中腦、神經(jīng)組織豐富,在腎、脾、皮膚、肝和膽汁中含量也較高。用酶學(xué)方法測定游離膽固醇(FC)是生化檢測中的常用方法,其特點是:1、靈敏度、準確度、精密度均高;2、使用溫和的反應(yīng)條件;3、操作簡便;4、適用于自動分析儀。
游離膽固醇(FC)檢測試劑盒(COD-PAP雙試劑比色法)又稱膽固醇氧化酶法或膽固醇氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法等,血液中的膽固醇約1/3為游離膽固醇,2/3為與脂肪酸結(jié)合的膽固醇酯,后者被膽固醇酯酶(CEH)水解為游離膽固醇,游離膽固醇被膽固醇氧化酶(COD)氧化成膽甾烯酮,并產(chǎn)生過氧化氫,再經(jīng)過氧化物酶(POD)催化,使4-氨基安替比林與酚(三者合稱PAP)反應(yīng),生成紅色醌亞胺色素(Trinder反應(yīng)),當(dāng)CEH不存在時,膽固醇酯不能被水解,因而只能檢測到游離膽固醇的含量,分光光度計在500~520nm處進行比色測定。本試劑盒用于定量測定人或動物的血清、血漿、腦脊液、細胞、組織等樣本中的游離膽固醇含量。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成:
產(chǎn)品名稱 | 1000T | 保存條件 | |
試劑(A):Good's 溶液 | Good's buffer 顯色劑 活性劑、穩(wěn)定劑 | 2×25ml | 2-8℃ |
試(B):COD-POD溶液 | 膽固醇氧化酶、 POD、4-氨基安替比林 | 2×25ml | -20℃,避光 |
臨用前,按 A:B=1:1混合,即為COD-PAP工作液,4℃保存。 | |||
試劑(C):FC標準(5mmol/L) | 1ml | 2-8℃,避光 | |
試劑(D):ddH2O | 1ml | 室溫 |
自備材料:
1. 生理鹽水或PBS
2. 離心管、小試管或96孔板
3. 水浴鍋或恒溫箱
4. 分光光度計或酶標儀
5. 全自動或半自動生化分析儀
操作步驟(僅供參考):
1. 樣本處理:
①血清、血漿、腦脊液樣本:從待測樣本中分離出的血清或血漿不應(yīng)有溶血,直接檢測,如超過線性范圍,用生理鹽水稀釋后檢測。
②細胞樣本:
取適量的細胞(一般推薦>10以上),1000g離心10min,棄上清,留取沉淀。
用PBS或生理鹽水清洗1~2次,1000g離心10min,棄上清,留取沉淀。
加入200~300μl的PBS或生理鹽水勻漿,冰浴條件下超聲破碎細胞,功率300W,每次3~5s,間隔30s,重復(fù)3~5 次。亦可手動勻漿,制備好的勻漿液不可離心;亦可用1~2% Triton X-100冰浴30~60min,制備好的裂解液不可離心。
③組織樣本:準確稱取適量組織樣本,按質(zhì)量(g):生理鹽水或 PBS(ml)=1:9的比例,加入生理鹽水或PBS,冰浴條件下手動或機械勻漿。2500~3000g離心10min,取上清。
2. FC測定
酶標儀、全自動生化分析儀FC測定
加入物(μl) | 空白孔 | 標準孔 | 待測孔 |
ddH2O | 3 | - | - |
TC標準(5mmol/L) | - | 3 | - |
待測樣本 | - | - | 3 |
COD-PAP工作液 | 300 | 300 | 300 |
分光光度計(1ml比色杯)、半自動生化分析儀FC測定
加入物(ml) | 空白孔 | 標準孔 | 待測孔 |
ddH2O | 0.01 | - | - |
TC標準(5mmol/L) | - | 0.01 | - |
待測樣本 | - | - | 0.01 |
COD-PAP工作液 | 1 | 1 | 1 |
普通分光光度計(2ml比色杯)FC測定
加入物(ml) | 空白孔 | 標準孔 | 待測孔 |
ddH2O | 0.02 | - | - |
TC標準(5mmol/L) | - | 0.02 | - |
待測樣本 | - | - | 0.02 |
COD-PAP工作液 | 2 | 2 | 2 |
①各種儀器按上表依次加入試劑。充分混勻, 37℃水浴中孵育5min。
②立即用相應(yīng)儀器測定500~520nm吸光度,以空白孔(管)調(diào)零,讀取標準孔(管)、測定孔(管)的吸光度,分別記為 A標準、A測定。
機器參數(shù):
主波長/次波長 | 500/600nm |
反應(yīng)類型 | 終點法 |
反應(yīng)方向 | 升反應(yīng)(+) |
計算公式:
血清、血漿等液體樣本(空白調(diào)零):
FC(mmol/L)= A測定/A標準×5
血清、血漿等液體樣本(全自動生化分析儀):
FC(mmol/L)= (A測定- A空白)/(A標準- A空白)×5
組織樣本(空白調(diào)零):
FC(mmol/g)= A測定/A標準×5×V2/(m×1000)
組織樣本(全自動生化分析儀):
FC(mmol/g)= (A測定- A空白)/(A標準- A空白)×5×V/(m×1000)
細胞樣本(空白調(diào)零):
FC(mmol/L)= A測定/A標準×5×V2/V1
細胞樣本(全自動生化分析儀):
FC(mmol/L)= (A測定- A空白)/(A標準- A空白)×5×V2/V1
式中:m=組織樣本取樣量(g)
V1=細胞樣本取樣量(ml)
V2=樣本勻漿液總體積(ml)
參考區(qū)間:
【FC標準(5mmol/L)=442.48mg/dl】
健康成年人理想范圍:<1.7mmol/L(<67mg/dl)
性能指標:
外觀 | 無色至淡黃色澄清液體 |
線性范圍 | 0.1~13mmol/L(3.6~500mg/dl),R2>0.95 |
靈敏度 | 檢測下限 0.1mmol/L(3.6mg/dl) |
變異系數(shù) | 批內(nèi)<3%,批間<5% |
空白吸光值 | <0.1(1cm光徑) |
干擾因素 | 膽紅素<410μ mol/L;血紅蛋白<7g/L;甘油三脂<28.5mmol/L時,對結(jié)果無明細影響。 |
注意事項:
1. 上述低溫試劑避免反復(fù)凍融,以免失效或效率下降。
2. COD-PAP工作液如不經(jīng)常使用,應(yīng)充分溶解后分裝-20℃保存,可4℃短期保存。
3. 本法可直接用于檢測腦脊液中的FC含量,但不能直接檢測尿液中的FC含量,因為未經(jīng)處理的尿液中含有還原性物質(zhì),影響過氧化物酶反應(yīng)。
4. 檢測FC的血清或血漿宜用EDTA或肝素抗凝,如不能及時測定,密閉保存,4℃可穩(wěn)定一周,-20℃可以穩(wěn)定半年以上。
5. 本法線性范圍可達13mmol/L,如果樣本FC濃度過高,結(jié)果可能呈假性降低,應(yīng)用生理鹽水稀釋后重測,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
6. 本試劑盒既可作終點法檢測,又可作速率法檢測。
7. 本法不適于檢測總膽固醇的濃度,如需檢測總膽固醇(TC)含量,請選擇相關(guān)產(chǎn)品。
有效期:6個月有效。4℃運輸,-20℃保存。
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