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Triton X-100細胞裂解液

時間:2023/7/14閱讀:656
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Triton X-100細胞裂解液 

產品貨號:T15196

產品規格:100ml

產品簡介:

Triton X-100細胞裂解液是一種經典的快速裂解細胞組織并獲得蛋白的裂解液。所獲得的蛋白質可以用于 PAGE電泳,Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。Triton X-100、NaCl、Tris-HCl 等組成,并含有多種蛋白酶抑制劑成分,可以有效抑制蛋白的降解,并維持原有的蛋白間相互作用。作用原理是利用去污劑Triton X-100破壞脂質雙分子層,溶解胞質和細胞膜,破壞分子間微弱結合鍵的大部分蛋白質抗原。其濃度在0.1%~1%時即可滿足幾乎所有溶解的需求,且可補充等離子濃度的鹽及使pH接近中性。不宜用 Bradford法測定由Triton X-100 Lysis Buffer獲得樣本的蛋白濃度。 


產品組成:

試劑名稱規格保存條件

Triton X-100 Lysis Buffer100ml-20℃

PMSF(100mM)1.5ml-20℃


操作步驟(僅供參考):

(一)貼壁培養細胞 

1.取Triton X-100 Lysis Buffer室溫溶解混勻,加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。 

2.去培養液,用PBS、NS或無血清培養液清洗1次,低速離心,棄上清,留取沉淀。 

3.按照6孔板每孔加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例加入Triton X-100 Lysis Buffer。移液器輕輕吹打,使裂解液和細胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解,通常裂解液作用于細胞1~3s內,細胞就會被裂解。通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200~250μl。 

4.10000~12000g,4℃離心5~10min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。 

5.進行后續的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 

(二)懸浮培養細胞 

1.取Triton X-100 Lysis Buffer室溫溶解混勻,加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。 

2.低速離心懸浮細胞,棄上清,收集沉淀。 

3.用手指輕彈細胞,使其松散。按照6孔板每孔細胞加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入尚寶生物Triton X-100 Lysis Buffer。通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200~250μl。再用手指輕彈以充分裂解細胞,充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。 

4.10000~12000g,4℃離心5~10min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。 

5.進行后續的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 

(三)組織樣本 

1.取Triton X-100 Lysis Buffer 室溫溶解混勻后,加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。 

2.把組織剪切成細小的碎片,越小越好。 

3.取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織,迅速用液氮研磨,研磨過程盡量控制在1~2min之內,以減少蛋白的降解。 

4.按照每20mg組織加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15~30min。 

5.步驟3、4亦可以采用如下過程:按照每20mg組織加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的Triton X-100 Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿,直至充分裂解,該過程盡量控制在1~2min之內,以減少蛋白的降解。 

6.10000~12000g,4℃離心5~10min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。 

7.進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 

  

注意事項:

1.去除貼壁細胞的培養液后,如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不用清洗。 

2.如果裂解不充分可以適當增加裂解液的用量,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。 

3.如果細胞量較多,必需分裝成50~100萬細胞/離心管,然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分,而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸,相對比較容易裂解充分。 

4.如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。 

5.溶解Triton X-100 Lysis Buffer時,應盡量縮短溶解時間,避免有效成分失效。 

6.裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物,屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續實驗。如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子,例如NF-KB、p53等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉錄因子。 

7.細胞裂解的操作步驟,應置于冰上或4℃進行。

  

有效期:12個月有效。


 


 


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