糖化血清蛋白含量檢測試劑盒(NBT法)(微量法)
產品貨號:BA1893
產品規格:100T/96S
產品簡介:
血清葡萄糖與白蛋白及其它血清蛋白分子N末端的氨基發生非酶促糖化反應,形成高分子酮胺結構,在堿性條件下與硝基四氯唑藍反應,生成紫紅色化合物甲臜。在530nm波長處比色,測定其OD值,與DMF標準比較,即可求得其含量。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
產品組成:
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體5mL×1瓶 | 2-8℃ |
試劑二 | 液體2mL×1瓶 | -20℃ |
試劑三 | 液體30mL×1瓶 | 2-8℃ |
試劑四 | 液體2mL×1瓶 | 2-8℃ |
標準品 | 粉劑×1支 | -20℃ |
溶液的配制:
標準品:臨用前加入0.8mL試劑二,充分溶解,配制成10mmol/L DMF標準液,2-8℃保存4周;再取20µL 10 mmol/L DMF標準液和30µL試劑二混合配制成成4mmol/L標準溶液待測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、恒溫培養箱、低溫離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
血清(漿):收集血清(漿)到離心管內,按照血清(漿)體積(mL)∶試劑一體積(mL)= 10∶1的比例(建議吸取0.2mL血清(漿)于EP管中,加入0.02mL試劑一),充分混勻,于37℃保溫30min。
二、測定步驟
1. 可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調節波長至530nm,蒸餾水調零。
2. 標準溶液:按照標準溶液體積(mL):試劑一體積(mL)= 10∶1的比例(建議吸取0.2mL 4mmol/L標準溶液于EP管中,加入0.02mL試劑一),充分混勻,于37℃保溫30min。
3. 按下表步驟加樣:
試劑名稱(μL) | 測定管 | 空白管 | 標準管 | 標準空白管 |
樣本 | 10 | - | - | - |
蒸餾水 | - | 10 | - | - |
標準溶液 | - | - | 10 | - |
試劑二 | - | - | - | 10 |
試劑三 | 200 | 200 | 200 | 200 |
37℃顯色15min | ||||
試劑四 | 10 | 10 | 10 | 10 |
充分混勻,取200μL于微量玻璃比色皿或96孔板中,于530nm處測定吸光度。分別記為A測定、A空白、A標準、A標準空白。ΔA測定=A測定-A空白,ΔA標準=A標準-A標準空白。 |
注:空白管和標準空白管均只需做1-2次。
三、糖化血清蛋白含量計算
糖化血清蛋白含量(mmol/L)=C×ΔA測定÷ΔA標準×F= 4×ΔA測定÷ΔA標準×F
C:標準溶液濃度,4mmol/L;F:稀釋倍數。
注意事項:
1. 顯色完成后,應立即加入試劑四;建議一次性不要做太多樣本,防止試劑四加入不及時導致測定結果受到影響。
2. 如果測定吸光值A>1.5或ΔA>1,建議稀釋樣本后再測定,計算公式中乘以稀釋倍數;如果測定吸光值較低或接近空白OD值,建議增加操作表中的樣本量后再進行測定(空白管、標準管、標準空白管需要增加至相同體積量)。
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