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Tris-氯化銨紅細(xì)胞裂解液(無菌)
產(chǎn)品貨號:R22027
產(chǎn)品規(guī)格:100ml/500ml
產(chǎn)品簡介:
在生物科研領(lǐng)域,經(jīng)常需要去除紅細(xì)胞,去除紅細(xì)胞的方法有多種,如ACK Lysis Buffer、Tris-氯化銨紅細(xì)胞裂解液、Gey's Lysis Buffer。Tris-氯化銨紅細(xì)胞裂解液(TrisNH4Cl Red Blood Cell Lysis Buffer),也稱為Tris-NH4Cl Lysis Buffer,是一種從人、鼠或其他哺乳動物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細(xì)胞的溶液,其主要有效成分為NH4Cl。
尚寶生物 Tris-氯化銨紅細(xì)胞裂解液(無菌)經(jīng)過優(yōu)化配方,在裂解無核紅細(xì)胞的同時幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。本裂解液經(jīng)過濾除菌,經(jīng)過Tris-NH4Cl Lysis Buffer處理過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測。
產(chǎn)品組成:
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
Tris-氯化銨紅細(xì)胞裂解液(無菌) | 100ml/500ml | 4℃ |
自備材料:
1. 胰蛋白酶
2. 離心機(jī)
3. PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液
4. 胎牛血清
操作步驟(僅供參考):
(一)組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作
1. 制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液,離心棄上清。
2. 裂解: 加入3~5倍細(xì)胞沉淀體積的Tris-NH4Cl Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解1~2min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。
3. 離心: 4℃,400~500g離心5min,棄紅色上清。如無低溫離心機(jī),本步驟亦可在室溫下操作。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不wan全,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次。
5. 洗滌:根據(jù)實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻重懸沉淀。4℃,400~500g 離心2~3min,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。
6. 如有必要,重復(fù)上述步驟5一次,共洗滌1~2次。
7. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。
(二)組織細(xì)胞樣本的快速操作(無需洗滌)
1. 制備細(xì)胞懸液:新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液,離心棄上清。
2. 裂解:加入細(xì)胞5倍細(xì)胞沉淀體積的Tris-NH4Cl Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解1~2min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。
3. 加入15~20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻。
4. 離心:4℃,400~500g離心5min,棄紅色上清,本離心步驟亦可在室溫下操作。
5. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不wan全,可以重復(fù)上述步驟2~4各一次。
6. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。
(三)血液樣本的常規(guī)操作
1. 取新鮮抗凝血,400~500g離心5min,棄上清。
2. 裂解: 加入6~10倍細(xì)胞沉淀體積的Tris-NH4Cl Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解1~5min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。(特別提醒:對于鼠的血液,裂解1~2min 已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜延長裂解時間至4~5min,并且裂解過程中輕輕搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。)
3. 離心: 4℃,400~500g 離心 5min,棄紅色上清。如無低溫離心機(jī),本步驟亦可在室溫下操作。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不wan全,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。
5. 洗滌: 根據(jù)實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻重懸沉淀。4℃,400~500g 離心2~3min,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。
6. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。
注意:對于微量或少量的血液樣本,可以不用第1步操作,可直接加入10倍血液體積的Tris-NH4Cl Lysis Buffer 進(jìn)行第2步操作,并在4℃或室溫裂解4~15min。對于鼠的血液,裂解4~5min已經(jīng)足夠; 對于人的外周血,宜延長裂解時間至10min,但通常不宜超過15min,并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。
(四)血液樣本的快速操作(無需洗滌)
1. 新鮮抗凝血中加入10倍體積的Tris-NH4Cl Lysis Buffer,輕輕吹打混勻,裂解4~15min。
本操作步驟在4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。(特別提醒:對于鼠的血液,裂解4~5min已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜延長裂解時間至10min,但通常不宜超過15min,并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。)
2. 加入20~30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻。
3. 400~500g離心5min,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不wan全,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。
5. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。
注意事項:
1. 制備細(xì)胞懸液時應(yīng)根據(jù)實驗需要,不一定要制備成單細(xì)胞懸液。
2. 后續(xù)試驗如果是用于細(xì)胞培養(yǎng),操作過程中應(yīng)注意無菌操作,盡量在超凈工作臺內(nèi)操作。
3. 離心步驟盡量在4℃離心機(jī)上操作。
4. 常規(guī)步驟不快速步驟的區(qū)別在于:常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心,可以節(jié)省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好,不需要大體積的離心管;快速步驟少了一次離心過程,洗滌效果略差一些,同時需要大體積的離心管。
5. 離心洗滌后,通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的檢測。
6. 如果經(jīng)過ACK Lysis Buffer處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取,在處理細(xì)胞時不必使用DEPC處理的溶液,即無需在該操作中特意去除RNase。
7. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期:
12個月有效。
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