精品亚洲a∨无码专区毛片-精品亚洲aⅴ无码午夜在线-精品亚洲aⅴ无码午夜在线观看-精品亚洲aⅴ无码一区二区三区-精品亚洲aⅴ无码专区毛片-精品亚洲aⅴ在线

上海尚寶生物科技有限公司
初級會員 | 第4年

400-611-0007

α-淀粉酶活性檢測試劑盒 (碘-淀粉比色法) (微量法)使用說明書

時間:2023/8/25閱讀:262
分享:

α-淀粉酶活性檢測試劑盒 (-淀粉比色法) (微量法)

產(chǎn)品貨號:BA1928

 

產(chǎn)品規(guī)格:100T/48S

 

產(chǎn)品簡介:

淀粉酶負責(zé)水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵, 生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖,同時使淀粉的粘度降低,因此又稱為液化酶。

α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷鍵水解,產(chǎn)生葡萄糖、麥芽糖以及糊精等,碘可以與未被水解的淀粉結(jié) 合,生成在570nm下有特征吸收峰的復(fù)合物,其深淺可計算出淀粉酶的活力單位。

α-AL耐熱,但是β-淀粉酶可在 70℃鈍化15min。因此粗酶液經(jīng)過70℃鈍化15min,就只有α-AL能夠催化淀粉水解。

 

注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

 

產(chǎn)品組成:

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

試劑一

粉劑×1

2-8

試劑二

液體10mL×1

2-8

試劑三

液體30mL×1

2-8

標(biāo)準品

粉劑×1

2-8

溶液的配制:

1. 試劑一:臨用前加入6.25mL試劑三,置于常溫水中并加熱至煮沸,期間不斷攪拌粉劑至溶解,用不完的試劑2-8℃保存8周;

2. 標(biāo)準品:10mg淀粉標(biāo)準品。臨用前加10mL試劑三,置沸水浴中振蕩溶解,配成1mg/mL淀粉標(biāo)準液,2-8℃保存四周。

 

需自備的儀器和用品:

酶標(biāo)儀/可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研缽/勻漿器、 蒸餾水。 

 

操作步驟:

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

1. 組織:稱取約0.1g樣本,加1mL蒸餾水勻漿;勻漿后在室溫下放置提取15min,每隔5min振蕩1次,使其充分提取;6000g,室溫離心10min,吸取上清液即為淀粉酶原液。

2. 液體:直接檢測。(若有渾濁則離心后進行測定)

二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到570nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零。

2. 將淀粉標(biāo)準液用蒸餾水稀釋為0.40.20.10.050.0250.01250.00625mg/mL的標(biāo)準溶液。

 

序號

稀釋前濃度(mg/mL

標(biāo)準液體積(µL

稀釋后濃度(mg/mL

稀釋后濃mg/mL

1

1

200

300

0.4

2

0.4

200

200

0.2

3

0.2

200

200

0.1

4

0.1

200

200

0.05

5

0.05

200

200

0.025

6

0.025

200

200

0.0125

7

0.0125

200

200

0.00625

3. 實驗中每個標(biāo)準管需100µL標(biāo)準溶液。

4. 按操作表依次加入各試劑:

試劑(μL

測定管

對照管

空白管

標(biāo)準管

標(biāo)準空白管

α-淀粉酶原液

100

100

-

-

-

蒸餾水

-

-

100

-

100

標(biāo)準溶液

-

-

-

100

-

70℃水浴15min左右,冷卻

試劑一

100

-

100

-

-

蒸餾水

-

100

-

100

100


試劑二

50

50

50

50

50

混勻后吸取200μL于微量玻璃比色皿或者96孔板中讀取測定管、對照管、空白管、標(biāo)準管、標(biāo)準空白管570nm的吸光度,分別記為A測定、A對照、A空白、A標(biāo)準和A標(biāo)準空白,計算ΔA測定=A空白-A測定-A對照),ΔA標(biāo)準=A標(biāo)準-A標(biāo)準空白。標(biāo)準曲線和標(biāo)準空白管只需做1-2次。

三、α-淀粉酶活性計算

1. 標(biāo)準曲線的繪制

根據(jù)標(biāo)準管的濃度(xmg/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(yΔA標(biāo)準),建立標(biāo)準曲線。根據(jù)標(biāo)準曲線,將ΔA測定(yΔA測定)帶入公式計算樣本濃度(xmg/mL)。

2. α-淀粉酶活性計算

(1)按照樣本質(zhì)量計算

單位定義:每g組織每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活力單位。

α-淀粉酶活性 (U/g 質(zhì)量)=x×V÷(W×V÷V樣總)÷T=0.1×x÷W

(2)按照蛋白質(zhì)濃度計算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。

α-淀粉酶活性 (U/mg prot)= x×V÷V×Cpr÷T=0.1×x÷Cpr

(3)按照液體體積計算

單位定義:每mL液體每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。

α-淀粉酶活性 (U/mL)= x×V÷V÷T=0.1×x

V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.1mLV樣總:樣本總體積,1mLCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW: 樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時間,10min

 

注意事項:

1. 吸光值大于1.5或者ΔA大于0.8時,可以對樣本進行適當(dāng)稀釋后測定。

 

 

 


會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
撥打電話
在線留言
主站蜘蛛池模板: 狠狠色噜噜狠狠狠狠98| 国产午夜福利伦理300| 波多野结衣一区二区三区无码电影| 美女久久久久久久久久久| 中文字幕av人妻一本二本| www伊人网| 色一性一乱一伦一一区二区三区 | 欧洲美女人一级毛片| 黑人大战亚裔美女| av无码成人精品区日韩| 久久久久国产一区二区| 制服丝袜手机在线| 国产一级久久免费特黄| 国产乱伦中文无无码视频试看| 色噜噜综合熟女人妻一区| 日韩做A爰片久久毛片A片毛茸茸| 成人精品影视| 久久亚洲av天码| 欧美日本国产日韩激情视频| 亚洲av无码潮喷在线观看| 91精品导航在线网址| 久久国产夜色精品噜噜亚洲a| 在线播放一区二区精品产| 欧美特黄三级成人| 国产丝袜一区二区在线播放| 无码视频在线观看| 亚洲熟女片嫩草影院| 成人无码精品一区二区三区亚洲区| 伦理97| 精品无人乱码一区二区三区| 国产成人18黄网站免费网站| 天天躁日日操狠狠操欧美老妇 | 欧美日韩国产综合第一区| 91涩涩视频| 精品国产一区二区三区高清观看| 换脸国产AV一区二区三区| 丫丫色导航| 亚洲精品久久久WWW小说| 成人乱人伦精品小说不卡xxxx综合| 久久无码中文字幕无码| 中文字幕精品一区二区三区在线|