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單胺氧化酶(MAO)檢測試劑盒(醛苯腙比色法)

時間:2023/11/27閱讀:147
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單胺氧化酶(MAO)檢測試劑盒(醛苯腙比色法)

產(chǎn)品貨號:BA1574

 

產(chǎn)品規(guī)格:50T/100T

 

產(chǎn)品簡介:

單胺氧化酶(Monoamine OxidaseMAO)是一組催化多種單胺類化合物氧化脫氨的酶,屬于細胞外酶,含有銅離子,分布于肝臟、腎臟等組織的線粒體內(nèi),其含量分布為肝臟>心臟>腎臟>腦>肺>骨骼肌。血小板、胎盤中也含有MAO。線粒體中的MAO與膜緊密結(jié)合,僅少量為可溶性的,存在于細胞質(zhì)中,血液和結(jié)締組織中的 MAO為水溶性。

尚寶生物 單胺氧化酶 (MAO)檢測試劑盒 (醛苯腙比色法)其檢測原理是待測樣品在MAO作用下,氧化底物芐胺生成芐醛,后者經(jīng)催化反應(yīng)生成醛苯腙,呈棕紅色,通過分光光度計檢測470nm處吸光度,根據(jù)標準曲線即可測出MAO活力。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。

 

產(chǎn)品組成:

名稱

50T

100T

保存條件

試劑(A): 芐醛標準(5mmol/L)

1ml

2ml

2-8℃,避光

試劑(B): MAO Assay buffer

50ml

100ml

室溫

試劑(C): 芐胺緩沖液

50ml

100ml

2-8℃,避光

試劑(D): 芐醛顯色液

25ml

50ml

2-8℃,避光

試劑(E): 芐醛顯色緩沖液

50ml

100ml

室溫

 

自備材料:

1. 蒸餾水

2. 離心管或小試管

3. 比色杯

4. 分光光度計

 

使用方法:

1. 準備樣品:

血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備,可以直接用于本試劑盒的測定,尿液通常也可以直接用于測定,-70℃凍存,用于MAO的檢測。

細胞或組織樣品:取恰當細胞或組織進行勻漿,低速離心取上清, -70℃凍存,用于MAO的檢測。

高活性樣品:如果樣品中含有較高活性的MAO,可以使用MAO Assay buffer稀釋。

④(選做)樣品準備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,以便于后續(xù)計算單位蛋白重量組織或細胞內(nèi)的MAO含量。

2. 稀釋標準品:用MAO Assay buffer稀釋芐醛標準(5mmol/L)0.5mmol/L,即為芐醛標準工作液,4℃保存,備用以芐醛標準工作液 (0.5mmol/L),按下表制備標準曲線。

加入物

0

1

2

3

4

5

6

7

8

芐醛標準工作液(ml)

0

0.01

0.02

0.04

0.08

0.12

0.16

0.20

0.24

MAO Assay buffer(ml)

0.75

0.74

0.73

0.71

0.67

0.63

0.59

0.55

0.51

相當于芐醛(nmol/)

0

5

10

20

40

60

80

100

120

相當于MAO單位(nmol/h?L)

0

12.5

25

50

100

150

200

250

300

3. MAO檢測:按照下表設(shè)置空白管、標準管、測定管,溶液應(yīng)按照順序依次加入,并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過高,可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。


空白管

標準管

測定管

待測樣品(如血清等)(ml)

0.2

-

0.2

MAO Assay buffer(ml)

0.5

0.5

0.5

芐胺緩沖液(ml)

0.5

1.0

1.0

混勻,37℃水浴2h

芐醛顯色液(ml)

0.5

0.5

0.5

芐胺緩沖液(ml)

0.5

-

-

混勻,37℃水浴20min

芐醛顯色緩沖液(ml)

1.0

1.0

1.0

蒸餾水(ml)

1.0

1.0

1.0

4. 混勻,分光光度計470nm處檢測吸光度值,比色杯1.0cm光徑,以蒸餾水調(diào)零,讀取各管吸光度值。一般應(yīng)數(shù)小時內(nèi)檢測完畢。繪制標準曲線,根據(jù)(A測定-A空白 )之差值在標準曲線上查出MAO活力單位。酶活力高于上限者,應(yīng)將樣品稀釋后重新測定,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

 

計算:

MAO活性單位的定義:在37℃ 1ml血清中MAO 1h催化底物產(chǎn)生1nmol芐醛為一個MAO酶活力單位。根據(jù)酶活性定義,計算出樣品中的MAO活性。

以標準管芐醛nmol數(shù)為橫坐標,以吸光度值為縱坐標,繪制標準曲線,用(A測定-A空白之差值在標準曲線上查出待測樣品的芐醛nmol數(shù))

血清MAO活力(U/mlnmol/h?ml)=芐醛(nmol)×VT ×N/t×Vs =芐醛(nmol)×2.5

組織MAO活力(U/mgnmol/h?mg)=芐醛(nmol)×VT ×N/(t×Vs ×待測樣品蛋白濃度mg/ml)

式中:

VT =待測樣品總體積(ml)

N=待測樣品檢測前的稀釋倍數(shù)

Vs =檢測時所用樣品體積(ml)

t=反應(yīng)時間(min)

 

注意事項:

1. 膽紅素濃度小于257μmol/L,血紅蛋白濃度小于4g/L,對MAO活力檢測沒有影響。

2. 若更換為國際單位,應(yīng)除以60

3. 加入芐醛顯色緩沖液后,應(yīng)1h內(nèi)檢測完畢。

4. 在皂化過程中,震蕩不要劇烈,以免形成乳化層。

5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


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