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單胺氧化酶(MAO)活性檢測試劑盒(微量法)

時間:2023/11/27閱讀:135
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單胺氧化酶(MAO)活性檢測試劑盒(微量法)

注意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

 

產品貨號:BA1078

 

產品規格:100/96

 

產品簡介:

MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動物的各種器官,特別是分泌腺、腦、肝臟,在無脊椎動物、 豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質代謝,含量較低,具有重要的生理功能,其活性能反映肝纖維化的程度。此外,MAO 活性異常導致細胞內單胺類神經遞質運轉出現紊亂,從而引發多種病癥。

MAO 催化單胺類底物脫氨生成相應的醛,進一步氧化成酸;底物在360nm處有特征吸收峰,測定360nm光吸收下降的速率,計算MAO活性。

 

產品內容:

提取液一:液體100ml×1瓶,4℃保存。

提取液二:液體100ml×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體60ml×2瓶,4℃保存。

試劑二:液體2ml×1管,4℃避光保存。

 

需自備的儀器和用品:

天平、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96UV板、蒸餾水。

 

操作步驟

一、粗酶液提取:

1、組織:按照組織質量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液一)進行冰浴勻漿,10000g4℃,離心10min,棄沉淀;把上清轉移到另一預冷的離心管,10000g4℃,離心30min,棄上清;加入1.0 mL 預冷的提取液二,震蕩混勻,16000g4℃,離心40min,棄上清;沉淀加入預冷的1.0 mL試劑一,震蕩混勻,即粗酶液(可用于可溶性蛋白濃度測定)。取上清置于冰上待測。

2、細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加1mL提取液一),冰浴超聲破碎細胞(功率300W,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g4℃,離心10min,棄沉淀;把上清轉移到另一預冷的離心管,10000g4℃,離心30min,棄上清;加入1.0 mL預冷的提取液二,震蕩混勻,16000g4℃,離心40min,棄上清;沉淀加入預冷的1.0 mL試劑一,震蕩混勻,即粗酶液(可用于可溶性蛋白濃度測定)。取上清置于冰上待測。

3、血清:直接測定。

二、測定操作表

1、分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長至360nm

2、操作表

試劑名稱(μL

空白管

測定管

酶液


20

試劑一

180

160

試劑二

20

20

混勻,于微量石英比色皿/96UV 板,空白管調零,測定360nm處吸光值A1,然后37℃水浴60min,測定360nm 處吸光值A2△A=A1-A2

注意:空白管只需測定一次。

三、MAO活性的計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下:

1、按蛋白含量計算

酶活定義:37℃pH7.6時,每毫克蛋白質1min內轉化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。

MAO活性(U/ mg prot=△A÷?÷d ×V反總÷V×Cpr÷T= 114×△A÷Cpr

2、按樣本質量計算:

酶活定義:37℃pH7.6時,每克樣品1min內轉化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。

MAO活性(U/ g=△A÷?÷d ×V反總÷V÷V樣總×W÷T= 114×△A÷W

3、按細胞數量計算

酶活定義:37℃pH7.6時,每104個細胞1min內轉化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。

MAO活性(U/ 104 cell=△A÷?÷d ×V反總÷V÷V樣總×細胞數量)÷T= 114×△A÷細胞數量

4、按照液體體積計算

酶活定義:37℃pH7.6時,每升血清1min內轉化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。

MAO活性(U/ L=△A÷?÷d ×V反總÷V= 114000×△A

ε:底物摩爾消光系數,1460L/ mol /cmd:比色皿光徑,1cmV反總:反應總體積,0.2mLV樣:反應中樣本體積,0.02mLV樣總:加入提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mLT:反應時間,60minW:樣本質量,g

b.96孔板測定的計算公式如下:

1、按蛋白含量計算

酶活定義:37℃pH7.6時,每毫克蛋白質1min內轉化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。

MAO活性(U/ mg prot=△A÷?÷d ×V反總÷V×Cpr÷T= 228×△A÷Cpr

2、按樣本質量計算:

酶活定義:37℃pH7.6時,每克樣品1min內轉化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。

MAO活性(U/ g=△A÷?÷d ×V反總÷V÷V樣總×W÷T= 228×△A÷W

3、按細胞數量計算

酶活定義:37℃pH7.6時,每104個細胞1min內轉化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。

MAO活性(U/ 104 cell=△A÷?÷d ×V反總÷V÷V樣總×細胞數量)÷T= 228×△A÷細胞數量

4、按照液體體積計算

酶活定義:37℃pH7.6時,每升血清1min內轉化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。

MAO活性(U/ L=△A÷?÷d ×V反總÷V= 228000×△A

ε:底物摩爾消光系數,1460L/ mol /cmd:比色皿光徑,0.5cmV反總:反應總體積,0.2mLV樣:反應中樣本體積,0.02mLV樣總:加入提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mLT:反應時間,60minW:樣本質量,g

注意事項:

1. 吸光度變化應該控制在0.01~0.8之間。否則加大樣品量或稀釋樣品,注意計算公式中參與計算的稀釋倍數要相應改變。

2. 樣品蛋白質含量需要另外測定。 


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