類胡蘿卜素(Carotenoid)檢測試劑盒(比色法)
產品貨號:BA1646
產品規格:50T
產品簡介:
葉綠體是光合作用的細胞器,在光合作用研究中,常需要用提取的葉綠體展開下游研究工作。葉綠體中所含的色素主要有兩大類,葉綠素(包括葉綠素a和葉綠素b)和類胡蘿卜素(包括胡蘿卜素和葉黃素),它們與類囊體膜上的蛋白質結合,成為色素蛋白復合體,其中葉綠素又稱葉綠體色素(Chlorophyll)。類胡蘿卜素是一種脂溶性且具有營養特性的化合物,給植物和動物提供天然色素,是重要的抗氧化劑,并有能力轉換為必需維生素。類胡蘿卜素可預防細胞,組織和基因損毀,增強身體免疫系統,抵御感染,減少癌癥風險,保護心臟。
類胡蘿卜素(Carotenoid)檢測試劑盒(比色法)檢測原理是類胡蘿卜素不溶解于水,而溶于有機溶劑,以有機溶劑粗提類胡蘿卜素,根據朗伯-比爾定律,某有色溶液的吸光度(A)與其中溶質濃度(C)和液層厚度(L)成正比,即 A=αCL,其中α為比例常數,當溶液濃度以百分比濃度為單位,層液厚度為1cm時,α為該物質的吸光系數。在本試劑盒情況下,葉綠素a、葉綠素b、類胡蘿卜素在665nm 、649nm、470nm處有最大吸收波,根據經驗公式可計算出葉綠素a、葉綠素b、總葉綠素、類胡蘿卜素含量。該試劑盒主要用于植物組織中葉綠素、類胡蘿卜素的提取以及以分光光度計定量檢測葉綠素a、葉綠素b、總葉綠素、類胡蘿卜素含量。該試劑僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
產品組成:
產品名稱 | 50T | 保存條件 |
試劑(A): Carotenoid Assay buffer | 530ml | 室溫 |
試劑(B): 提取粉劑 | 3g | 室溫 |
自備材料:
1. 研缽或勻漿器
2. 離心管
3. 濾紙或紗布
4. 比色杯、分光光度計
操作步驟 (僅供參考) :
1. 類胡蘿卜素提取:
①取菠菜或其他植物新鮮葉片,洗凈,擦干,去中脈,稱取剪碎的新鮮樣品0.1g,置于研缽或勻漿器,加入少量提取粉劑(約50mg)和1ml Carotenoid Assay buffer,研磨或勻漿成液態。
②將研磨液或勻漿液轉移至10ml離心管,用少量Carotenoid Assay buffer沖洗研缽或勻漿器數次,最后連殘渣一同倒入10ml離心管,補加Carotenoid Assay buffer至10ml,混勻,避光放置5min-2h。
(注:也可將組織剪碎,加入Carotenoid Assay buffer,避光放置12~36h,期間晃動數次,使組織與提取試劑充分接觸,當組織接近白色,即表示色素提取完成,可直接進行測定。)
2. 觀察底部組織殘渣接近于白色,即為提取,如果仍有較多組織顏色,應再加入Carotenoid Assay buffer繼續避光放置。
3. 濾紙或三層紗布過濾,留取濾液,即為類胡蘿卜素粗提液。
4. Carotenoid測定:取類胡蘿卜素粗提液加入光徑為1cm的比色杯,以Carotenoid Assay buffer調零,分光光度計測定粗提液在665nm、649nm、470nm處吸光度(A665、A649、A470)。
計 算:
葉綠素a含量(mg/g)=Ca×V×N/(W×1000)
葉綠素b含量(mg/g)=Cb×V×N/(W×1000)
總葉綠素含量(mg/g)=CT ×V×N/(W×1000)
類胡蘿卜素含量(mg/g)=CC×V×N/(W×1000)
式中:Ca=13.95×A665-6.88×A649(mg/L)
Cb=24.96×A649-7.32×A665(mg/L)
CT=6.63×A665+18.08×A649(mg/L)
CC=(1000×A470-2.05×Ca -114.8×Cb)/245(mg/L)
=(1000×A470-2851.304×A649+811.7385×A665)/245(mg/L)
V=類胡蘿卜素粗提液體積(ml)=10(ml)
N=稀釋倍數
W=樣品鮮重或干重(g)
1000=ml與L的單位換算
注意事項:
1. 為避免葉綠素和類胡蘿卜見光分解,操作時應盡量避光,研磨或勻漿時應盡量縮短時間。
2. 測定吸光度值大于1時,可適當稀釋后再行測定。
3. Carotenoid Assay buffer易揮發,不用時需擰緊瓶蓋。
4. 色素粗提液不能出現渾濁現象,否則應重新過濾。
5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期:12個月有效。
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