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上海尚寶生物科技有限公司
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磷酸化蛋白提取試劑盒僅供科研

時間:2024/7/15閱讀:102
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磷酸化蛋白提取試劑盒

產品貨號:15231

產品規格:50T/100T

產品簡介:

本試劑盒用于哺乳動物組織和細胞中提取胞質蛋白,試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑,作用較為強烈,可獲得總蛋白,可用于免疫印跡實驗等基礎研究實驗,由于含有上述的酶抑制劑,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。

產品組成:

試劑名稱

50T

100T

保存條件

裂解液

50mL

100mL

2~8

磷酸酶抑制劑(100×

0.5mL

1mL

-20

蛋白酶抑制劑(100×

0.5mL

1mL

-20

PMSF100×

0.5mL

1mL

-20

操作步驟:

1mL的冷裂解液中各加入10µL的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF;混勻,放置在冰上備用;

1. 組織總蛋白的提取

1) 稱取0.1g的新鮮組織,放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處,用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎,然后加入0.5-1mL 的新配置的裂解液,研磨直至沒有明顯的組織塊,這個過程注意冰上操作;

2) 將組織勻漿液移入1.5mLEP管中,412000g離心30min

3) 吸取上清至新的管中;

4) 進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。

(提取好的蛋白建議保存于-80℃,即用即取,避免反復凍融,避免長時間儲存。)

2. 細胞總蛋白的提取

1) 裂解液的用量:107個細胞需要裂解液1mL

2) 貼壁細胞:棄去培養基,用冷的PBS洗兩次,棄去PBS,然后加入計算好的細胞裂解液;在冰上用細胞刮刀進行刮離細胞,將刮離的細胞裂解液移入EP管中,顛倒裂解20-30min

3) 懸浮細胞:4400g 離心收集細胞,用冷的PBS洗兩次細胞,同樣按細胞數加入裂解液,渦旋10s,放置冰上裂解10min,重復3-4次;

4) 裂解完畢之后,將細胞裂解液412000g離心30min

5) 將上清移入新的EP管中;進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。

(提取好的蛋白建議保存于-80℃,即用即取,避免反復凍融,避免長時間儲存。)

注意事項:

1. 實驗過程,所有試劑都要需要預冷或者即融,保證操作過程中的低溫環境。

2. PSMF(有毒)現用現加,因為PMSF在水溶液中會快速降解。

有效期:12個月有效。



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