產品名稱：BCA蛋白濃度測定試劑盒

產品貨號：34001

產品規格：100 次/250 次/500 次

產品簡介：

  BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根據目前世界上常用的兩種蛋白濃度檢測方法之一 BCA 法研制而成，實現了蛋白濃度測定的簡單、高穩定性、高靈敏度和高兼容性。靈敏度高，檢測濃度下限達 到 25μg/ml，小檢測蛋白量達到 0.5μg，待測樣品體積為 1-20μl。在 50-2000μg/ml 濃度范圍內有較好的線性關系。

  BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響，可以兼容樣品中高達 5%的 SDS，5%的 Triton X-100，5%的 Tween20、60、80。但本試劑盒受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保 EDTA 低于 10mM， 無 EGTA，二硫蘇糖醇(DTT)低于 1mM，β-巰基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于 0.01%。不適用 BCA 法時建議試用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒。

包裝清單：

操作步驟：

1. 蛋白標準品的準備 取適量 5mg/ml 蛋白標準，用 PBS 稀釋至終濃度為 0.5mg/ml。例如取 50μl 5mg/ml 蛋白標準，加入 450μl PBS 即可配制成 0.5mg/ml 蛋白標準。蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也 可以用 0.9% NaCl 或 PBS 稀釋標準品。稀釋后的 0.5mg/ml 蛋白標準需-20ºC *保存。

2. BCA 工作液配制 根據樣品數量，按 50 體積 BCA 試劑 A 加 1 體積 BCA 試劑 B(50:1)配制適量 BCA 工作液，充分混勻。例如 5ml BCA 試劑 A 加 100μlBCA 試劑 B，混勻，配制成 5.1ml BCA 工作液。BCA 工作液室溫 24 小時內穩定。

3. 蛋白濃度測定

a. 將標準品按 0、1、2、4、8、12、16、20μl 加到96孔板的標準品孔中，加標準品稀釋液補足到 20μl，相當于標準品濃度分別為 0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。

b. 加適當體積樣品到 96 孔板的樣品孔中。如果樣品不足20μl，需加標準品稀釋液補足到 20μl。請注意記錄樣品體積。

c. 各孔加入 200μlBCA工作液，37ºC放置20-30分鐘。

注: 也可以室溫放置 2 小時，或 60ºC 放置 30 分鐘。BCA法測定蛋白濃度時，顏色會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應會因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或適當延長孵育時間。

d. 用酶標儀測定 A562，或 540-595nm 之間的其他波長的吸光度。

e. 根據標準曲線和使用的樣品體積計算出樣品的蛋白濃度。

常見問題：

1. 測定標準曲線時發現隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。 可能的原因是樣品中含有嚴重干擾 BCA 法測定蛋白濃度的物質。

2. 是否每次測定時都需要做標準曲線？ 建議每次測定時都做標準曲線。因為 BCA 法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應的速度 和溫度有關，所以除非準確控制顯色反應的時間和溫度，否則如需準確測定宜每次都做標準曲線。

注意事項：

1. 需酶標儀一臺，測定波長為 540-595nm 之間，*562nm 。需 96 孔板。如果沒有酶標儀，也可以使用普通 的分光光度計測定，但測定時，需根據比色皿的小檢測體積，適當加大 BCA 工作液的用量使不小于小 檢測體積，樣品和標準品的用量可相應按比例放大也可不變。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒 可以測定的樣品數量可能會顯著減少。

2. 如發現樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景，請試用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒。

3. EDTA 濃度必須小于 10mM，不兼容 EGTA。不適用 BCA 法時，請試用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒。

4. 本產品*于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住 宅內。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。