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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100ml/500ml |
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貨號 | T16121 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
紅細胞裂解液(10×)
產品貨號:T16121
產品規格:100ml/500ml
產品簡介:
在生物科研領域,經常需要去除紅細胞。去除紅細胞的方法有多種,如ACK LysisBuffer、Tris-氯化銨紅細胞 裂解液、Gey's Lysis Buffer。紅細胞裂解液(Red Blood Cell LysisBuffer)是一種從人、鼠或其他哺乳動物等體內的 組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細胞的溶液,其主要有效成分為 NH4Cl。
尚寶生物 RBC Lysis Buffer(10×)配方經過優化不同于ACK Lysis Buffer,在裂解無核紅細胞的同時幾乎不損 傷淋巴細胞(Lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。對于裂解、去除有細胞核紅細胞,例如鳥或禽類的紅細胞,效 果不佳,裂解類似細胞時,不建議采用。該裂解液經過濾除菌,為10×的濃縮液,使用1×RBC Lysis Buffer 處理 過的血液或組織細胞樣品可以用于后續的細胞培養、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規的分析和檢測, 尤其適用于流式細胞檢測或需要高濃度裂解液的情況。
產品組成:
名稱 規格 保存條件 RBC Lysis Buffer(10×) 100ml/500ml 4℃
自備材料:
1. 胰蛋白酶
2. 離心機
3. PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液
操作步驟(僅供參考):
注意:絕大多數情況下,應使用無菌去離子水稀釋 RBC Lysis Buffer(10×)至 1×使用,流式細胞術除外。
(一)組織細胞樣本的常規操作
1. 制備細胞懸液: 新鮮組織經過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,通過適當方法制備成細胞懸液,離心棄上清。
2. 裂解:加入 3~5 倍細胞沉淀體積的 1×RBC Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解 1~2min。本操作步驟在 4℃ 條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。
3. 離心: 4℃,400~500g 離心 5min,棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。
4. 如果發現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟 2 和步驟 3 各一次。
5. 洗滌:根據實驗要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,輕柔混勻重懸沉淀。4℃,400~500g 離心 2~3min,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液 的量一般應大于細胞沉淀體積的 5 倍以上。
6. 如有必要,重復上述步驟 5 一次,共洗滌 1~2 次。
7. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀,進行計數、培養等后續實驗。
(二)組織細胞樣本的快速操作(無需洗滌)
1. 制備細胞懸液:新鮮組織經胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,制備細胞懸液,離心棄上清。
2. 裂解:加入細胞 5 倍細胞沉淀體積的 1×RBC Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解 1~2min。 本操作步驟在 4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。
3. 加入 15~20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,輕柔混勻。
4. 離心:4℃,400~500g 離心 5min,棄紅色上清,本離心步驟亦可在室溫下操作。
5. 如果發現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟 2~4 各一次。
6. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀,進行計數、培養等后續實驗。
(三)血液樣本的常規操作
1. 取新鮮抗凝血,400~500g 離心 5min,棄上清。
2. 裂解: 加入 6~10 倍細胞沉淀體積的 1×RBC Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解 1~5min。本操作步驟在 4℃ 條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。(特別提醒:對于鼠的血液,裂解 1~2min 已經足夠,對于人的外周 血,宜延長裂解時間至 4~5min,并且裂解過程中輕輕搖動以促進紅細胞裂解。)
3. 離心: 4℃,400~500g 離心 5min,棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。
4. 如果發現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟 2 和步驟 3 一次。
5. 洗滌: 根據實驗要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,輕柔混勻重懸沉淀。4℃,400~500g 離心 2~3min,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液 的量一般應大于細胞沉淀體積的 5 倍以上。
6. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀,進行計數、培養等后續實驗。
注意:對于微量或少量的血液樣本,可以不用第 1 步操作,可直接加入 10 倍血液體積的 ACK Lysis Buffer 進 行第 2 步操作,并在 4℃或室溫裂解 4~15min。對于鼠的血液,裂解 4~5min 已經足夠; 對于人的外周血,宜 延長裂解時間至 10min,但通常不宜超過 15min,并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。
(四)血液樣本的快速操作(無需洗滌)
1. 新鮮抗凝血中加入 10 倍體積的 1×RBC Lysis Buffer,輕輕吹打混勻,裂解 4~15min。 本操作步驟在 4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。(特別提醒:對于鼠的血液,裂解 4~5min 已經足 夠,對于人的外周血,宜延長裂解時間至 10min,但通常不宜超過 15min,并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅 細胞裂解。)
2. 加入 20~30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,輕柔混勻。
3. 400~500g 離心 5min,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4. 如果發現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟 2 和步驟 3 一次。
5. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀,進行計數、培養等后續實驗。
注意事項:
1. 制備細胞懸液時應根據實驗需要,不一定要制備成單細胞懸液。
2. 后續試驗如果是用于細胞培養,操作過程中應注意無菌操作,盡量在超凈工作臺內操作。
3. 離心步驟盡量在 4℃離心機上操作。
4. 常規步驟不快速步驟的區別在于:常規步驟多了一步洗滌過程的離心,可以節省洗滌液的用量,并且洗滌效 果也更好,不需要大體積的離心管;快速步驟少了一次離心過程,洗滌效果略差一些,同時需要大體積的離 心管。
5. 離心洗滌后,通常極微量的紅細胞不會影響后續的檢測。
6. 如果經過 1×RBC Lysis Buffer 處理后的樣品后續用于總 RNA 的提取,在處理細胞時不必使用 DEPC 處理的 溶液,即無需在該操作中特意去除 RNase。
7. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期:12 個月有效。
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